2011 Fiscal Year Annual Research Report
病原菌の新規「タイプ6分泌装置」蛋白質群にみられる収縮性ファージと共通の立体構造
| Project/Area Number |
21770164
|
|---|
| Research Institution | Tokyo Institute of Technology |
|---|
Principal Investigator |
金丸 周司 東京工業大学, 大学院・生命理工学研究科, 助教 (50376951)
|
|---|
| Keywords | グラム陰性菌 / 分泌装置 / バクテリオファージ / 構造解析 / T6SS / βヘリックス / VgrG |
|---|
| Research Abstract |
1.VgrG1C^<M467-his>のトリプシン消化による安定なフラグメントの探索・結晶化
大腸菌O157-VgrG1C^<M467-his>をトリプシンにより消化しArg560のC末端側で切断された断片が得られた。この断片(即ちVgrG1C^<G561-his>)の結晶化を試み、合計15の結晶化スクリーニングキット(1400条件)を試し、最終的に100mM CHES pH8.8-9.0,～50% PEP426,700mM CsClの条件で結晶が得られた。
2.VgrG1C^<G561-his>の結晶構造解析
この、VgrG1C^<G56-his>の結晶をスイスのSLS-PXIIIビームラインにてデータ収集を行い、フルセットのX線回折データセットが得られた(分解能は～2.5A)。位相決定のため、SeMetの誘導体の結晶化を試みたが、未だ結晶は得られていない。SrCl_2ならびにPt誘導体を添加した結晶化バッファーで結晶が得られている。
3.^<His>SlyD-N末端欠失VgrG蛋白質の発現系の構築
大腸菌O157ならびに大腸菌CFT073のVgrG蛋白質6種のC末端ドメインに関して、蛋白質の可溶化の実績のある大腸菌SlyD蛋白質をN末端に付加した大量発現系を構築した。SlyDを付加しない場合不溶性にしか発現しなかったVgrG-C末端ドメインの可溶性各分への発現に成功した。そのうち、^<His>SlyD-VgrG1^<L363>に関しては精製に成功したが、多くの会合体が検出された。この会合体は、還元剤を添加することで電気泳動上移動度が変化することより、ジスルフィド結合を介した会合が強く示唆された。
|
-
[Journal Article] Crystallographic analysis reveals octamerization of viroplasm matrix protein P9-1 of Rice black streaked dwarf virus2012
Author(s)
Akita F, Higashiura A, Shimizu T, Pu Y, Suzuki M, Uehara-Ichiki T, Sasaya T, Kanamaru S, Arisaka F, Tsukihara T, Nakagawa A, Omura T
-
Journal Title
J Virol
Volume: 86(2)
Pages: 746-756
DOI
Peer Reviewed
-
-
-
[Journal Article] Dual modification of a triple-stranded β-helix nanotube with Ru and Re metal complexes to promote photocatalytic reduction of CO(2)2011
Author(s)
Yokoi N, Miura Y, Huang CY, Takatani N, Inaba H, Koshiyama T, Kanamaru S, Arisaka F, Watanabe Y, Kitagawa S, Ueno T
-
Journal Title
Chem Commun (Camb)
Volume: 47(7)
Pages: 2074-2076
DOI
Peer Reviewed
-
-
-
-
-
