2010 Fiscal Year Annual Research Report
樹木の遺伝子組換えに向けた各種プロモーターの発現誘導評価とその利用
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21780153
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| Research Institution | Kagawa University |
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Principal Investigator |
福元 健志 香川大学, 農学部, 産学官連携研究員 (70467835)
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| Keywords | 樹木 / プロモーター評価 / プロトプラスト |
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| Research Abstract |
本研究では、高等植物での有効性がすでに報告されている各種プロモーター制御下を用いて、各種草本系および木本系植物から得た単細胞(プロトプラスト)でのレポーター遺伝子の発現を比較評価する実験系を構築する事により、各植物種と各プロモーター活性の対応を明らかにすることを目的とした。本研究の実施により、35Sプロモーターによる発現誘導活性が一般的に低いとされる樹木系における高発現プロモーターの利用に関する知見を得る事を目指している。
材料系に関してはタバコ、イネ、ポプラ、シラカンバ、カンキツなど5種類の植物を用いて、すでに高等植物での使用実績のあるプロモーターについて遺伝子発現誘導活性の比較評価を昨年度より開始している。
まず、プロトプラストを利用した一過的GFP発現系を用いてGFP蛍光細胞数を指標としたプロモーターの評価系を立ち上げた。その結果、改変型35Sプロモーターを利用した際、カンキツ類プロトプラストでのGFP蛍光細胞が最大3倍程度まで増加する事を明らかにした。一方で、本研究で目指す極少量のプロトプラストを用いた活性評価系ではGUSおよびLUC活性の検出が困難であった。そこで、定量的RT-PCR法によるプロモーター活性の評価法も同時並行で進行させることにした。すでに、GFP遺伝子(恒常的発現プロモーター制御下、標準化に利用)とRFP遺伝子(任意のプロモーター制御下)を同時に発現する評価ベクターの構築を終了し、本法による高発現プロモーターの評価の有効性の検証を開始した。さらに、マングローブ樹木の一種であるロッカクヒルギについて、遺伝子導入条件を検討し、改変型35Sプロモーターの有効性を確認し、上記の解析材料に追加した。
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