2009 Fiscal Year Annual Research Report
牛卵胞の体外培養系を用いた卵胞選抜機構の解明と野生動物種への応用
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21780286
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
永野 昌志 Hokkaido University, 大学院・獣医学研究科, 准教授 (70312402)
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| Keywords | 獣医学 / 動物 / 卵胞 / 卵子 / 体外培養 |
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| Research Abstract |
牛卵巣皮質から直径1mm以下の初期胞状卵胞を単離・破砕して卵丘卵子顆粒層複合体(COGC)を採取した。COGCは96穴プレートを用いて14日間発育培養(IVG)を行った。IVG培地には、0、1、10、100および2000ng/mlのFSHを添加した(それぞれFSH 0、FSH 1、FSH 10、FSH 100およびFSH 2000群)。14日間培養後の生存COGCは体外成熟(IVM)培養(22h)行い、核成熟能の検討を行った。IVG後の生存COGC率は、FSHOおよびFSH 2000群に比べてFSH 1およびFSH 100群で高く(p<0.05)、FSH 10で高い傾向にあった(p=0.06)。卵子直径は、培養期間中に全ての実験群で増加した(p<0.05)が、IVG14日後の卵子直径はFSH 2000群が他の群と比べて小さかった(p<0.05)。IVM後のMII率は、全ての実験群において差が認められなかった。次にIVG培地にエストラジオール(E2)無添加、0.1あるいは1μg/ml添加とFSHを無添加または0.1μg/ml添加により6群(エストロジェン/FSH:0/0、0/0.1、0.1/0、0.1/0.1、1/0および1/0.1)を設定した。培地にE2およびFSHを添加しなかった0/0群では全ての卵子がIVG前の卵子直径に関わらず培養14日目までに死滅した。同様に、FSHのみを添加した0/0.1群においても全ての卵子が培養14日目までに死滅した。E2添加した4群において、1/0.1群の生存COGC率は他の3群に比べて高かった(p<0.01)。E2添加した4群で卵子直径がIVGにより増加した(p<0,05)。IVG後の卵子直径は低E2濃度の2群で高濃度の2群に比べて小さかった(p<0.05)。E2添加した4群において、生存COGC内の卵子のMII率に差は認められなかった。本研究から、IVG培地に1および100ng/mlのFSHを添加することにより牛の初期胞状卵胞由来の卵子(直径100μm未満)の体外生存率を改善できることが示された。また、高濃度(1μg/ml)のE2添加により卵子直径が増加することが示された。
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[Journal Article] Transforming growth factor-α in a defined medium during in vitro maturation of porcine oocytes improves their developmental competence and intracellular ultrastructure2009
Author(s)
Mito, T., Yoshioka, K., Nagano, M., Suzuki, C., Yamashita, S., Hoshi, H.
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Journal Title
Theriogenology 72
Pages: 841-850
Peer Reviewed
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