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2010 Fiscal Year Annual Research Report

寄生性アピコンプレキサ特異的な細胞内輸送の解析

Research Project

Project/Area Number 21790411
Research InstitutionNational Institute of Infectious Diseases

Principal Investigator

中野 由美子  国立感染症研究所, 寄生動物部, 主任研究官 (30321764)

Keywordssmall GTPase / メンブレントラフィック / Rab5 / アピコンプレキサ / Plasmodium falciparu / 感染症
Research Abstract

マラリア原虫の赤血球細胞質のエンドサイトーシスには低分子量GTPaseのPfRab5aが関与することが報告されていた。本研究で、PfRab5には3つのアイソタイプが存在し、その中のPfRab5bと名付けたアイソタイプは膜への結合がN末端のミリストイル化に依存することが分かった。熱帯熱マラリアだけでなく、ミリストイル化されるRab5bを持つ原虫は、全てのマラリア原虫種とトキソプラズマに保存していた。PfRab5bの細胞内局在や機能を解析するために大腸菌内でリコンビナントタンパク質を発現精製し、抗体を作成することを試みた。これまで、GSTやHis融合蛋白質等、複数の発現条件を検討した結果、pCold1ベクターによる低温条件でのタンパクの発現誘導、かつ大腸菌内でのシャペロンとの共発現(groES,groEL)によって、可溶性画分に組換え蛋白質を発現させることに成功した。しかし、可溶性画分に分画されるタンパク質量が十分ではなく、抗体を作製するのには不十分であった。最終的に、コドンを大腸菌K12株に最適した人口遺伝子PfRab5bを合成し、シャペロン能を持つpColdTFベクターで発現を試みた。人工合成遺伝子とゲノム配列のヌクレオチドレベルでの相同性は75%であった。大腸菌をmid-logまで培養した後、22℃で0.1mMのIPTGで18時間発現誘導をかけた。約半分の発現したタンパク質が可溶性に文画され、400mlの大腸菌培養液から抗体作成に十分な1.7mgのリコンビナントタンパク質を得た。この人工合成遺伝子で得られたリコンビナントタンパク質は抗体を作成するのに使用されるとともに、in vitroでPfRab5bとの結合タンパク質の探索にも使用可能である。

  • Research Products

    (4 results)

All 2011 2010

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (3 results)

  • [Journal Article] Marked Amplification and Diversification of Products of ras Genes from Rat Brain, Rab GTPases, in the Ciliates Tetrahymena thermophila and Paramecium tetraurelia.2010

    • Author(s)
      Saito-Nakano, Y., Nakahara, T., Nakano, K., Nozaki, T., Numata, O.
    • Journal Title

      The Journal of Eukaryotic Microbiology

      Volume: 57 Pages: 389-399

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Diversity of vesicular trafficking in phagocytic protozoa and significance of traffic in Entamoeba histolytica.2011

    • Author(s)
      Yumiko Saito-Nakano, Kentaro Nakano, Tomoyoshi Nozaki.
    • Organizer
      The 45th Annual Japan-U.S.Joint Conference on Parasitic Diseases : Intestinal and Free-Living Protozoan Parasites Meeting
    • Place of Presentation
      国立感染症研究所(東京都)
    • Year and Date
      20110110-20110112
  • [Presentation] Diversity and Significance of Vesicular Trafficking in Entamoeba histolytica.2010

    • Author(s)
      Yumiko Saito-Nakano, Mami Okada, Gil Mallari Penuliar, Yuki Hanadate, Carol A.Gilchrist, Oswald Crasta, William A.Petri, Jr., Zhangjun Fei, Nino Trapaidze, Tomoyoshi Nozaki.
    • Organizer
      Amebiasis Montreal 2010 Workshop.
    • Place of Presentation
      Holel le Crystal(カナダ国モントリオール市)
    • Year and Date
      20100922-20100924
  • [Presentation] Genetic identification of drug resistance in Plasmodium falciparum using archive blood smears.2010

    • Author(s)
      Yumiko Saito-Nakano
    • Organizer
      The 7^<th> Taiwan-Japan Symposium on Immunization and Travel Medicine.
    • Place of Presentation
      台湾CDC(台湾国、台北市)
    • Year and Date
      20100909-20100910

URL: 

Published: 2012-07-19  

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