2010 Fiscal Year Annual Research Report
抗リウマチ薬投与下のヒト成熟破骨細胞における関節リウマチ特異自己抗原の機能解析
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21790946
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
野島 崇樹 京都大学, 医学研究科, 非常勤講師 (30327514)
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| Keywords | 破骨細胞 / 自己抗原 / 関節リウマチ |
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| Research Abstract |
(研究実績の概要)
ヒト末梢血単核細胞(PBMC)を用いた成熟破骨細胞形成系におけるカルパイン・カルパスタチン系の役割の解明
1 健常人協力者のPBMCよりマグネットビーズと抗ヒトCD14モノクローナル抗体を用いてCD14(+)細胞を分離し、10%FBS・M-CSF(25ng/ml)・ODF(20ng/ml)入りαMEMで培養して多核破骨細胞を回収する系を用いた。
2 上記、ヒトPBMCからの成熟破骨細胞形成系において、カルパイン・カルパスタチン系の蛋白発現を詳細に調べたところ、calpain1とcalpain2に蛋白発現の変化はみられなかったが、calpastatinはday3-6にかけて全長蛋白が分解されることが確認された。
3 次に破骨細胞分化過程においてcalpain活性を確認したところ、day3-6-9とcalpain活性は有意に上昇することが確認された。
4 cell permeableなcalpastatinを用いた実験で、破骨細胞の形成ならびに吸収能が抑制されることが確認された。
5 最後に、破骨細胞分化過程においてTNFα(100ng/ml)刺激を行うことで、15分後に細胞内calpain活性が上昇することが示された。
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