2011 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子変異マウスを用いた尿路結石形成におけるオステオポンチン機能部位の解明
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21791520
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
東端 裕司 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 研究員 (10381849)
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| Keywords | 尿路結石 / オステオポンチン / 遺伝子組換えマウス |
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| Research Abstract |
本研究は、尿路結石の形成に係わっているオステオポンチン(OPN)の各機能部位の役割を解明することが目的である。特に、トロンビン切断部位に注目し、トロンビン切断にて露出される機能的配列を特異的に認識する抗体を作成し、結石モデルマウスの治療を行った。
1.OPN機能部位変異トランスジェニックマウスを用いた機能解析:マウスOPNcDNAを変異させ、RGD配列、カルシウム結合部位をそれぞれ変異させたマウスを作成した。シュウ酸前駆物質の投与で、それぞれのマウスで結石の形態が異なり、結石形成が抑制された。機能部位毎に結石形成における役割が異なることが示唆された。
2.抗体を用いたOPNトロンビン切断後のSVVYGLR配列の機能解析:OPNはトロンビンで切断されることによって、SVVYGLR配列(マウスではSLAYGLR配列)が、C末端に表れることによって、α9β1integrinとの結合能など、炎症細胞の遊走に機能すると考えられる。合成ペプチド(VDVPNGRGDSLAYGLRS)をウサギに免疫して、精製したIgGを生成し、ポリクロナール抗体を作成し、8週齢C57BL/6マウスに、80mg/kgのグリオキシル酸を連日、腹腔内投与し、0、3、6,9日目に、作成した抗SLAYGLR抗体を経静脈的に投与(150μg、400μg)し、形成された結晶につき、定量的、形態学的評価を行った。抗SLAYGLR抗体投与によって、モデルマウスの結石形成部位が、対照と異なり、尿細管の末梢に存在し、結石形成量が低下していることが観察された。抗体投与により結石の微細な形態が異なることを電子顕微鏡で確認した。
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