2022 Fiscal Year Annual Research Report
マグロの雌雄を決定する遺伝子およびその作用機序の解明
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21H02275
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| Research Institution | Fisheries Research and Education Agency |
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Principal Investigator |
中村 洋路 国立研究開発法人水産研究・教育機構, 水産資源研究所(横浜), 主任研究員 (90463182)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
柳本 卓 国立研究開発法人水産研究・教育機構, 水産資源研究所(横浜), 主任研究員 (30443386)
相馬 智史 国立研究開発法人水産研究・教育機構, 水産資源研究所(横浜), 研究員 (80758657)
林田 貴雄 国立研究開発法人水産研究・教育機構, 水産技術研究所(長崎), 研究員 (40828456)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | マグロ / 性決定 / ステロイド代謝 / 遺伝子重複 / 転写制御 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
クロマグロの性決定遺伝子候補であるsult1st6yについて、そのリコンビナントタンパク質を作製するためにHisタグ付加発現ベクターを構築した。これを用いて大腸菌による発現誘導を試みたところ目的タンパク質が得られなかったため、GSTタグを用いた発現系について条件検討を行った。これらと並行してクロマグロ受精卵を用いたsult1st6yのノックアウト実験系を立ち上げた。具体的には、sult1st6yを特異的に切断するsingle-guide RNA (sgRNA)を設計するとともに、受精卵へのマイクロインジェクションによりsgRNA及びCas9タンパク質について処理条件を至適化した。また、クロマグロの生殖腺細胞を用いてシングルセルRNA-seqを実施するとともに、Assay for Transposase-Accessible Chromatin sequencing (ATAC-seq)によるオープンクロマチン領域の配列情報の収集を開始した。前年度に引き続いて、クロマグロ近縁魚種のsult1st6yおよびそのパラログであるsult1st6aの各エクソンを増幅するPCRプライマーを用いて、コシナガとビンナガにおいて各遺伝子のエクソン配列を決定した。また、マグロ属および他のサバ科魚類のゲノム配列を比較するとともに、sult1st6y/sult1st6aのホモログを用いた分子系統解析から、sult1st6yが出現した時期を推定することができた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の研究計画に記載した目標をおおむね達成しており、重要な成果も得られているため。
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| Strategy for Future Research Activity |
現在のところ特に大きな問題は生じておらず、当初の研究計画通りに進める予定である。
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