2023 Fiscal Year Annual Research Report
Structure and functional analysis of the SARS-CoV-2 Nucleocapsid Protein
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21H02449
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
朴 三用 横浜市立大学, 生命医科学研究科, 教授 (20291932)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
渡士 幸一 国立感染症研究所, 治療薬・ワクチン開発研究センター, 総括研究官 (40378948)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 新型コロナウイルス / Nタンパク質 / 構造生物学 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Nタンパク質はアミノ酸419残基を持つ分子量約50kDa.の分子量である。様々は発現系で確認した結果、大腸菌BL21Aで大量発現を確認することができた。Nタンパク質は、８両体の複合体の分子量は約450kDa.になり、Cryo-EMの単粒子解析には最適な試料である。また、自動結晶化ロボット分注システムによるNタンパク質の複合体での結晶化の条件検討を行った。約1000条件程度の条件検討を行った結果、0.1M-クエン酸ナトリウム pH5.0, 10%(w/v) PEG20K条件で、ポリ微結晶が得られた。この結晶化条件の結晶のシード結晶を用いて、良好な結晶作製を行った。様々な条件化で、結晶の大きさは平均30ミクロンの結晶を得ることができた。実験系のX線発生装置（40kV, 30mA）を使用し、反射点を確認した結果、約４A程度の反射点を得た。反射点の積分とスケーリングを行い、大まかなマップを計算したところ、分解能が低く、位相の決定の改善は至ってない。今後、質の良い結晶化の条件検討と、大型放射光施設SPring8及びPhoton FactoryでX線回折実験を行う予定である。さらに、複合体の試料により、Cryo-EMの単粒子解析にも試みる。
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| Research Progress Status |
令和5年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和5年度が最終年度であるため、記入しない。
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