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2022 Fiscal Year Annual Research Report

Function of SETD5 in pancreatic cancer

Research Project

Project/Area Number 21H02458
Research InstitutionTohoku University

Principal Investigator

中山 啓子  東北大学, 医学系研究科, 教授 (60294972)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 舟山 亮  東北大学, 医学系研究科, 准教授 (20452295)
中川 直  山陽小野田市立山口東京理科大学, 薬学部, 講師 (30707013)
細金 正樹  東北大学, 医学系研究科, 助教 (30734347)
Project Period (FY) 2021-04-01 – 2024-03-31
KeywordsSETD5 / 抗癌剤 / 細胞増殖 / エピゲノム / 膵臓癌
Outline of Annual Research Achievements

膵臓がん由来のRAS活性化型変異細胞(以降 PancCAと記載)のMEK阻害薬処理によって得られる阻害薬耐性細胞では、SETD5のタンパク質発現量が著しく増加することが報告されていた。
この報告の再現性と汎用性の確認を行うために、マウス膵臓がん由来のRAS活性化型変異細胞(KPC・AK4.4)を用いて実験を行った。MEK阻害薬またはHDAC3阻害薬を添加し3日から12日間培養した。形態の変化や増殖の低下が観察されたものの、その時のSETD5タンパク質蓄積を誘導することができなかった。これまでの報告では、MEK阻害薬耐性はSETD5タンパク質の蓄積に伴うエピゲノム変化によると報告されていたがその現象が認められていない。実験条件が多少異なっていたが、一般論としてRASの変異により増殖が活性化している腫瘍においてMEK阻害薬抵抗性獲得に、SETD5の発現量の変化は貢献してはいないとの結論に至った。
そこで、SETD5のRAS活性化型変異細胞における機能を調べるためにCRISPR-Cas9システムを用いて、SETD5を持たないRAS活性化型変異細胞を作製した。In vitro の培養系では、これらの細胞に明らかな増殖の違いや、MEK阻害薬に対する感受性の違いを見出すことはできなかった。次にそれらの細胞を同種移植することによって、in vivo での腫瘍の増殖能を調べた。腫瘍の増殖能、病理学的な解析に加えてトランスクリプトーム解析を行い、SDTD5欠失による腫瘍増殖に対する影響を細胞増殖とアポトーシスの観点から解析を行った。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

膵臓がん由来のRAS活性化型変異細胞のMEK阻害薬処理によって得られる阻害薬耐性細胞では、SETD5のタンパク質発現量が著しく増加することが報告されていた。しかし膵臓がん由来のRAS活性化型変異細胞(KPC・AK4.4)を、MEK阻害薬またはHDAC3阻害薬を濃度をいくつか調整して添加し3日から12日間培養し、MEK阻害薬またはHDAC3阻害薬に抵抗性のある細胞の取得を試みた。これらの細胞では増殖の低下を観察することができたもののSETD5タンパク質蓄積を誘導することはできなかった。この時点で、当初の研究計画を大幅に見直すことが必要となった。
そこで、SETD5のRAS活性化型変異細胞における機能を調べるために、CRISPR-Cas9システムを用いて、SDTD5を持たないRAS活性化型変異細胞を作製した。In vitro の培養系では、これらの細胞に明らかな増殖の違いや、MEK阻害薬に対する感受性の違いを見出すことはできなかった。それらの細胞を同種移植することによって、in vivo での腫瘍形成能力を検索した。腫瘍形成能は、体外より経時的に腫瘍を計測し、一定期間ののちに、腫瘍サンプルを取得して、病理学的検査を行うことに加えて細胞増殖能やアポトーシスを調べた。さらにトランスクリプトームを行うことで、SDTD5欠失による表現型の探索を行うこととして、堅実にデータの取得を行っている。

Strategy for Future Research Activity

今年度は、昨年度得られたトランスクリプトームデータの解析と、その結果得られるSETD5が調節している転写のメカニズムを明らかにすることを目標とする。SETD5の野生型と欠失細胞との比較に加え、in vitro培養下のSETD5欠失細胞とin vivoの差を調べる。In vitro での培養と3D腫瘍内では、細胞外の増殖シグナル強度が異なることが予想される。そのことを念頭に増殖シグナル下流で制御されている分子の発現に注目して解析を進める。
腫瘍増殖に効いていることが予想されるシグナルパスウェイが想定されれば、それらのパスウェイを遺伝学的または薬理学的に制御することで、その因果関係の検証を行う。また、今回の研究は膵臓がんを中心に行っているが、他の癌腫についても得られた知見を拡張することで、SETD5の腫瘍における機能の一般性についても検討する。今後は、昨年度得られたトランスクリプトームデータの解析と、その結果得られるSETD5が調節している転写のメカニズムを明らかにすることを目標とする。SETD5の野生型と欠失細胞との比較に加え、in vitro培養下のSETD5欠失細胞とin vivoの差を調べる。In vitro での培養と3D腫瘍内では、細胞外の増殖シグナル強度が異なることが予想される。そのことを念頭に増殖シグナル下流で制御されている分子の発現に注目して解析を進める。
腫瘍増殖に効いていることが予想されるシグナルパスウェイが想定されれば、それらのパスウェイを遺伝学的または薬理学的に制御することで、その因果関係の検証を行う。また、今回の研究は膵臓がんを中心に行っているが、他の癌腫についても得られた知見を拡張することで、SETD5の腫瘍における機能の一般性についても検討する。

  • Research Products

    (8 results)

All 2023 2022 Other

All Journal Article (7 results) (of which Peer Reviewed: 7 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Neurobehavioral characteristics of mice with SETD5 mutations as models of IDD23 and KBG syndromes2023

    • Author(s)
      Nakagawa Tadashi、Hattori Satoko、Hosoi Toru、Nakayama Keiko
    • Journal Title

      Frontiers in Genetics

      Volume: 13 Pages: -

    • DOI

      10.3389/fgene.2022.1022339

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] A novel variant in the transmembrane 4 domain of ANO3 identified in a two-year-old girl with developmental delay and tremor2022

    • Author(s)
      Aihara Yu、Shirota Matsuyuki、Kikuchi Atsuo、Katata Yu、Abe Yu、Niihori Tetsuya、Funayama Ryo、Nakayama Keiko、Aoki Yoko、Kure Shigeo
    • Journal Title

      Journal of Human Genetics

      Volume: 68 Pages: 51~54

    • DOI

      10.1038/s10038-022-01082-5

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] High levels of chromosomal instability facilitate the tumor growth and sphere formation2022

    • Author(s)
      Iemura Kenji、Anzawa Hayato、Funayama Ryo、Iwakami Runa、Nakayama Keiko、Kinoshita Kengo、Tanaka Kozo
    • Journal Title

      Cancer Science

      Volume: 113 Pages: 2727~2737

    • DOI

      10.1111/cas.15457

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Sex-Specific Differences in the Transcriptome of the Human Dorsolateral Prefrontal Cortex in Schizophrenia2022

    • Author(s)
      Yu Zhiqian、Ueno Kazuko、Funayama Ryo、Sakai Mai、Nariai Naoki、Kojima Kaname、Kikuchi Yoshie、Li Xue、Ono Chiaki、Kanatani Junpei、Ono Jiro、Iwamoto Kazuya、Hashimoto Kenji、Kinoshita Kengo、Nakayama Keiko、Nagasaki Masao、Tomita Hiroaki
    • Journal Title

      Molecular Neurobiology

      Volume: 60 Pages: 1083~1098

    • DOI

      10.1007/s12035-022-03109-6

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Heterozygous calcyclin-binding protein/Siah1-interacting protein (CACYBP/SIP) gene pathogenic variant linked to a dominant family with paucity of interlobular bile duct2022

    • Author(s)
      Kanno Miyako、Suzuki Mitsuyoshi、Tanikawa Ken、Numakura Chikahiko、Matsuzawa Shu-ichi、Niihori Tetsuya、Aoki Yoko、Matsubara Yoichi、Makino Satoshi、Tamiya Gen、Nakano Satoshi、Funayama Ryo、Shirota Matsuyuki、Nakayama Keiko、Mitsui Tetsuo、Hayasaka Kiyoshi
    • Journal Title

      Journal of Human Genetics

      Volume: 67 Pages: 393~397

    • DOI

      10.1038/s10038-022-01017-0

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] SPT16 ubiquitylation by DCAF14-CRL4 regulates FACT binding to histones2022

    • Author(s)
      Nakagawa Tadashi、Morohoshi Akane、Nagasawa Yuko、Nakagawa Makiko、Hosogane Masaki、Noda Yasuhiro、Hosoi Toru、Nakayama Keiko
    • Journal Title

      Cell Reports

      Volume: 38 Pages: 110541~110541

    • DOI

      10.1016/j.celrep.2022.110541

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Phenotypic heterogeneity in individuals with MECOM variants 2 families2022

    • Author(s)
      Niihori Tetsuya、Tanoshima Reo、Sasahara Yoji、Sato Atsushi、Irie Masahiro、Saito-Nanjo Yuka、Funayama Ryo、Shirota Matsuyuki、Abe Taiki、Okuyama Yuko、Ishii Naoto、Nakayama Keiko、Kure Shigeo、Imaizumi Masue、Aoki Yoko
    • Journal Title

      Blood Advances

      Volume: 6 Pages: 5257~5261

    • DOI

      10.1182/bloodadvances.2020003812

    • Peer Reviewed
  • [Remarks] 東北大学 細胞増殖制御分野

    • URL

      http://www.devgen.med.tohoku.ac.jp/

URL: 

Published: 2023-12-25  

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