2021 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
21H02734
|
|---|
| Research Institution | Hokkaido University |
|---|
Principal Investigator |
高田 礼人 北海道大学, 人獣共通感染症国際共同研究所, 教授 (10292062)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
|
| Keywords | ウイルス / 細胞侵入 / 抗体 / エピトープ / 治療薬 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
エボラおよびマールブルグウイルスは、ヒトまたはサルに急性で致死率の高い感染症（エボラ出血熱およびマールブルグ出血熱）を引き起こす。現在までに承認された抗体医薬はエボラウイルス1種のみに特異的であり、マールブルグウイルスには全く効果が無い。本研究は、これまでエボラウイルスに対する抗体に関して得られた知見を基にして、ウイルスの細胞侵入に関わる特定のエピトープに着目することによって、マールブルグ出血熱に対して有効な抗体医薬の開発に資する事を目的とする。
マールブルグウイルス（Angola株）の表面糖蛋白質(GP)の遺伝子をゲノム内に組み込んだ増殖性の水疱性口炎ウイルス（シュードタイプウイルス）に感染させ回復したマウスに、マールブルグウイルス（Angola株）のGPを持つウイルス様粒子を腹腔内投与してブーストした。そのマウスから脾臓を採取し、脾細胞とミエローマ細胞を融合させ、通常の方法でハイブリドーマの作出を試みた。その結果、調べたマールブルグウイルス株（Angola、MusokeおよびRavn）全てに交差中和活性を示すモノクローナルIgG抗体およびAngolaとMusoke株にのみ中和活性を示すIgG抗体が複数得られた。
フィロウイルスのレセプターであるNPC1分子上のドメインC内に存在するloop構造（loop1およびloop2）を模した合成ペプチドをヒトNPC1のアミノ酸配列を基に設計した。これらのペプチドの中和活性を、非増殖性シュードタイプ水疱性口炎ウイルスを用いて解析した結果、阻害薬候補となるアミノ酸配列を見出した。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
新たな免疫法（増殖性水疱性口炎ウイルスを用いたシュードタイプウイルスを感染させる）を採用することによって、複数のマールブルグウイルス株を効率的に中和するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマが10クローン以上得られた。また、それぞれの株に対する抗体の反応性から、複数の中和エピトープの存在が示唆された。さらに、マールブルグウイルス感染阻害薬候補となる合成ペプチド（アミノ酸配列）を見出した。
|
| Strategy for Future Research Activity |
増殖性水疱性口炎ウイルスを用いたシュードタイプウイルスを用いてエスケープミュータントを選択する。エスケープミュータントに生じたアミノ酸変異を解析する事によって、得られた抗体のエピトープを詳細に解析する。さらに、競合ELISAによって抗体のエピトープ領域に関する情報を得る。また、GP-NPC1結合試験等によって中和のメカニズムを探索する。
|
