2021 Fiscal Year Annual Research Report
固形癌に対するCAR-T、ウイルス療法の併用による新規免疫療法の開発
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21H02999
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
粕谷 英樹 名古屋大学, 医学系研究科, 教授 (00402636)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
直江 吉則 名古屋大学, 医学系研究科, 特任准教授 (50392048)
松村 繁 名古屋大学, 医学系研究科, 特任講師 (60523511)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 腫瘍溶解性ウイルス / CAR-T細胞 / 腫瘍免疫 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は細胞療法や免疫チェックポイント阻害薬が十分な効果を上げないアンメットメディカルニーズ難治固形癌の新たな治療法を開発することを目的に、癌抗原とケモカインを同時に搭載した次世代型腫瘍溶解性ウイルスと標識癌抗原を認識するCAR-Tを新たに創造することである。そこで、本年度は癌抗原発現次世代腫瘍溶解性ウイルスならびに腫瘍溶解性ウイルスに搭載した癌抗原を認識するCAR-T細胞の作製を行った。
野生型HSV1のg34.5遺伝子座にウイルスゲノムとの相同組み換えを利用し、CMVプロモーターにより発現するヒトMesothelin（MSLN)を導入した。PCRによりスクリーニングを行い、ウイルスの単離精製を行った。得られたウイルス（HSV1-MSLN）の純度ををqPCR法で確認したところ、純度は99％以上で、癌抗原を発現する腫瘍溶解性ウイルスを得ることに成功した。マウス膵臓癌株Pan02にHSV1-MSLNを感染させたところ、MOI依存的にMSLNの発現が上昇した。
さらに、MSLNに対するCAR-T細胞の作製を行った。ヒトMSLNに対する一本鎖抗体にCD28膜貫通領域、さらに、CD3細胞内ドメインをタンデムに結合させたレトロウイルスベクターを作成した。レトロウイルスを用いてマウスT細胞に導入し、ヒトMSLNに対するCAR-T細胞を作製した。作成したCAR-T細胞はMSLN依存的に活性化し、IFNｇを産生した。また、HSV1-MSLNが感染したPan02細胞とCAR-T細胞を共培養したところ、CAR-T細胞からIFNgの産生を確認できた。
以上より、癌抗原発現次世代腫瘍溶解性ウイルスならびに腫瘍溶解性ウイルスに搭載した癌抗原を認識するCAR-T細胞の作製に成功した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究に必要な癌抗原発現次世代腫瘍溶解性ウイルスならびに腫瘍溶解性ウイルスに搭載した癌抗原を認識するCAR-T細胞の作製に成功した。
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| Strategy for Future Research Activity |
本年度は腫瘍溶解性ウイルスに癌抗原であるヒトMSLNを搭載することに成功した。今後、腫瘍内に免疫細胞の呼び込みが期待できるRANTES遺伝子のHSV1-MSLNへの搭載を行う。また、作成した腫瘍溶解性ウイルスとCAR-T細胞のin vivoにおける抗腫瘍効果を確認する。抗腫瘍効果確認後、腫瘍内免疫細胞の詳細な浸潤をFACS法にて確認する。
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Research Products
(6 results)
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[Journal Article] S-1 facilitates canerpaturev (C-REV)-induced antitumor efficacy in a triple-negative breast cancer model2021
Author(s)
Noriyuki Miyajima, Ibrahim Ragab Eissa, Mohamed Abdelmoneim, Yoshinori Naoe, Toru Ichinose, Shigeru Matsumura, Itzel Bustos-Villalobos, Nobuaki Mukoyama, Daishi Morimoto, Masahiro Shibata, Dai Takeuchi, Nobuyuki Tsunoda, Toyone Kikumori, Maki Tanaka, Yasuhiro Kodera, Hideki Kasuya
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Journal Title
Nagoya J Med Sci
Volume: 83
Pages: 683～696
DOI
Peer Reviewed
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