2021 Fiscal Year Research-status Report
細胞内のグアニン四重鎖を可視化するLight-up型蛍光リガンドの開発
| Project/Area Number |
21K05267
|
|---|
| Research Institution | Chiba University |
|---|
Principal Investigator |
飯田 圭介 千葉大学, 大学院理学研究院, 助教 (70719773)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
|
| Keywords | グアニン四重鎖 / G4 / G4リガンド |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
近年、細胞内の分子環境に応じて、グアニン四重鎖 (G4) と呼ばれる核酸の高次構造が形成されることが明らかとなっている。G4は、複製、転写、翻訳、さらにはmicro RNAやlong non-coding RNAの機能制御にも寄与することが報告されている。G4の新規機能の理解、制御に役立つのがG4に結合・安定化することが出来る化合物、G4リガンドであり、本研究ではこれらを扱う研究に取り組む。これまでに、G4を特異的に安定化、蛍光検出出来るLight up型蛍光G4リガンドを開発しており、これを用いて細胞内でストレス顆粒中のG4の可視化を達成している。
そこで本研究では、当該G4リガンドをさらなる化学ツールとして活用するため、当該化合物をビオチン化した化合物を合成した。本化合物 (bio-py) を用いることで、G4 と非 G4 の混合物の中からG4のみを取り出す事が可能なPull-down法を行う事ができる。まず、合成したbio-pyがG4に対する結合性を維持しているかを検証すべく、FRET融解実験を行ったところBio-pyのG4安定化能は未修飾のリガンドと比較するとわずかに低下するものの、G4への結合性は十分に保たれており、G4リガンドとしての活性を維持していることがわかった。現在はtotal RNAからG4のみをPull-downを行い、RT-qPCRによってG4を選択的に回収されているかを検証中である。検証を行い次第、超音波破砕したproteinも含むlysateからのG4のpull-downについても検討していく。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
これまでの研究をもとに、ビオチン化したG4リガンドを合成できたため。
|
| Strategy for Future Research Activity |
total RNAならびに超音波破砕したproteinも含むlysateからのG4のpull-downを検討していく。
|
| Causes of Carryover |
合成がメインとなり、抗体等の生化学用試薬の使用が多くなかった。そのため、次年度以降必要となるこれら高額の試薬の使用を念頭に次年度に一部持ち越すこととした。
|
