2022 Fiscal Year Research-status Report
鶏の体内における鶏貧血ウイルスの持続感染の検証とその感染機構に関する解析
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21K05949
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| Research Institution | National Agriculture and Food Research Organization |
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Principal Investigator |
山本 佑 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構, 動物衛生研究部門, 上級研究員 (30462542)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 鶏貧血ウイルス / 鶏 / 持続感染 / ウイルス検出法 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、鶏の体内における鶏貧血ウイルス（CAV）の持続感染の可能性について検証し、また感染機構の解明に取り組むことでCAV感染症の新たな一面を明らかにすることである。研究計画として、初年度（昨年度）はCAVを高感度に検出可能なin situ ハイブリダイゼーション法（ISH）およびリアルタイムPCRによるCAV遺伝子定量系の確立を目的としており、今年度および最終年度は鶏へのCAV長期感染実験の実施とサンプル解析、総合的な考察が予定されている。
今年度はSPF鶏（VALO社より調達）を用いた長期感染実験を複数回実施した。感染実験では、7日齢の幼雛にCAV（HS1/17株）10^5TCIDを筋肉内接種し陰圧アイソレーター内で飼育、臨床動態の観察および定期的な臓器や血液等の採材を6カ月間に渡って実施した。採材した臓器は、ウイルス学的検査のため乳剤作製後に保存したほか、ホルマリン固定し病理組織検査用サンプルを作製した。
感染実験では、接種後2週および4週目において軽度の貧血が認められたが、これ以降に目立った症状は観察されなかった。サンプルの一部を用いて、CAVを検出する病理組織検査（免疫組織化学およびISH）を実施したところ、ISHは免疫組織化学よりも高感度にCAVを検出することができた。感染初期には様々な臓器でCAV抗原もしくはCAV遺伝子が豊富に検出され、数か月後より脾臓や胸腺などのリンパ臓器を主体としてウイルスの検出が持続する興味深い知見が得られた。現在感染実験とサンプル解析は継続中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究の研究期間は3年であり、当初研究計画として、初年度（昨年度）は鶏貧血ウイルス（CAV）を高感度に検出可能なin situ ハイブリダイゼーション法（ISH）およびリアルタイムPCRによる遺伝子定量系の確立、今年度および最終年度は鶏へのCAV長期感染実験の実施とサンプル解析が予定されている。
今年度は、当初の研究計画に従ってSPF鶏を用いた6カ月に及ぶ長期感染実験を複数回実施し、臨床学的な評価および経時的な解析用サンプルを調整することができた。また初年度に開発した解析法を用いたサンプルの解析を開始した。現在解析の途中であるが病理組織検査により一部のリンパ臓器にCAV遺伝子が長期間存在する興味深い知見が得られている。以上より、現在までの進捗状況はおおむね順調に進展していると評価した。
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| Strategy for Future Research Activity |
現在行っている鶏の感染実験が次年度早期に終了する予定である。次年度は得られたサンプルの病理組織学的、ウイルス学的解析を継続して実施する。病理組織学的解析では、CAV抗原およびCAV遺伝子の経時的な体内分布を評価する。また臓器乳剤中のCAV遺伝子量の経時的な推移を求め、病理検査結果と照合する。更に中和抗体価を測定し、実験感染鶏群における抗体の動態を検証し、CAVの持続感染に関する総合的な考察を行う予定である。
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| Causes of Carryover |
ほぼ計画通り予算執行がなされ、残額は翌年度消耗品への使用分とした。
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