2021 Fiscal Year Research-status Report
膵管がんにおける一次繊毛消失の分子機構と影響の解明
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21K06528
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| Research Institution | Nara Institute of Science and Technology |
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Principal Investigator |
小林 哲夫 奈良先端科学技術大学院大学, 先端科学技術研究科, 助教 (80433994)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 一次繊毛 / 膵管がん |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ヒト膵管癌由来Panc1細胞において、中心小体タンパク質であるCEP164がヘッジホッグシグナルの転写因子であるGLI2の中心小体局在を制御することで、細胞増殖を抑制することを以前に報告している。今年度は、超解像顕微鏡解析を用いた免疫蛍光染色実験によりCEP164とGLI2が中心小体において共局在することを見出した。また、HEK293T細胞の過剰発現系を用いた免疫沈降実験によりCEP164とGLI2が共沈降することが分かった。さらに、CEP164, GLI2のN末端領域、C末端領域のみを発現するコンストラクトを用いて免疫蛍光染色実験、免疫沈降実験を行った結果、GLI2はCEP164との相互作用ドメインを介して中心小体に局在することが分かった。
先に、抱水クロラールを用いた薬理学的な手法によりPanc1細胞の一次繊毛を消失させると、Panc1細胞のコロニー形成能が亢進することを報告している。今年度は、ゲノム編集技術を用いて繊毛内輸送に必要なタンパク質であるIFT88に変異を挿入したPanc1細胞を作出し、IFT88欠失Panc1細胞では一次繊毛が完全に消失すること、IFT88欠失Panc1細胞にIFT88遺伝子を導入したレスキュー細胞では一次繊毛形成が回復することを確認した。そこでこの細胞の増殖能をコロニー形成実験で調べた結果、IFT88欠失Panc1細胞の増殖が亢進することが分かった。この結果は、以前に作出したIFT80欠失Panc1細胞と同様であり、これらの結果から膵管癌細胞における一次繊毛の欠失は細胞増殖を促進することが強く示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
CEP164とGLI2の相互作用メカニズムの解析が進んだため。また、膵管癌細胞における一次繊毛と増殖の関係が明らかになりつつあるため。
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| Strategy for Future Research Activity |
膵管癌細胞におけるヘッジホッグシグナルの制御機構を明らかにするため、CEP164とGLI2の相互作用ドメインの絞り込み、及び両者の結合を阻害した膵管癌細胞株の作出と解析を予定している。
また、膵管癌細胞の一次繊毛と増殖の関係を明らかにするため、IFT80, IFT88変異細胞の細胞周期と各種増殖関連因子の発現を調べる。
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