2024 Fiscal Year Annual Research Report
ガングリオシドのアシル鎖構造を介した自然免疫制御メカニズムの解明
| Project/Area Number |
21K06530
|
|---|
| Research Institution | Keio University |
|---|
Principal Investigator |
狩野 裕考 慶應義塾大学, 政策・メディア研究科(藤沢), 特任助教 (40774279)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2025-03-31
|
| Keywords | スフィンゴ糖脂質 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
最終年度は、以下の研究成果を得ることができた。(1)組み換え全長Casp4/11を用いた多量体アッセイ：昨年度に確立した組み換え全長Casp4/11精製系を用いて、組み換えタンパク質を発現・精製し、各種のスフィンゴ脂質およびリン脂質との相互作用解析を行った。これまでに得られていたGM3との相互作用解析に加えて、より広範なスフィンゴ脂質・スフィンゴ糖脂質との相互作用を網羅的に調べることが可能になった。その結果、組み換え全長Casp4/11と相互作用して、オリゴマー形成を誘導しうるスフィンゴ脂質・スフィンゴ糖脂質分子種を新たに見出すことができた。(2)組み換え全長Galectin-3の精製系の確立：Casp4/11に加えて、ガングリオシドの糖鎖構造を認識しうる糖鎖認識タンパク質として、組み換え全長Galectin-3の発現・精製系を確立した。LPS合成経路欠損大腸菌による発現系、アフィニティー精製系、ゲルろかクロマトグラフィー精製系を用いて、細胞レベルからタンパク質レベルに至るまで広く適用可能な精製レベルのGalectin-3を得た。
研究期間全体を通して実施した研究により、以下の成果を得ることができた。(1) GM3分子種および各種スフィンゴ糖脂質によるパイロトーシス誘導制御機構の解析, (2) 阻害剤、KO細胞によるパイロトーシス誘導経路の解析, (3) 組み換え全長Casp4/11精製系および多量体アッセイ系の確立, (4) 組み換え全長Galectin-3の精製系の確立, (5) 多量体アッセイによるスフィンゴ脂質・スフィンゴ糖脂質との相互作用解析。
|
-
[Journal Article] De Novo Glycan Display on Cell Surfaces Using HaloTag: Visualizing the Effect of the Galectin Lattice on the Lateral Diffusion and Extracellular Vesicle Loading of Glycosylated Membrane Proteins2024
Author(s)
A Miura, Y Manabe, K G N Suzuki, H Shomura, S Okamura, A Shirakawa, K Yano, S Miyake, K Mayusumi, C-C Lin, K Morimoto, J Ishitobi, I Nakase, K Arai, S Kobayashi, U Ishikawa, H Kanoh, E Miyoshi, T Yamaji, K Kabayama, K Fukase
-
Journal Title
Journal of the American Chemical Society
Volume: 146
Pages: 22193～22207
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
