2021 Fiscal Year Research-status Report
オートファジー細胞死を標的とする新規肺腺癌治療薬の開発
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21K06691
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| Research Institution | University of Miyazaki |
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Principal Investigator |
南 謙太朗 宮崎大学, 医学部, 薬剤師 (20735956)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
池田 龍二 宮崎大学, 医学部, 教授 (50398278)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | オートファジー / 肺腺癌 / がん抑制遺伝子 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
BHLHE41がどのようにオートファジーまたは細胞死を誘導しているかを調べるため、本年度はBHLHE41の標的遺伝子について注目し検討を行った。
BHLHE41が発現するとフェロトーシス抑制因子AIFM2の発現が減少することはマイクロアレイ解析からわかっていたが、実際に発現が減少しているかをmRNA発現レベルで検討したところ確かにA549細胞でBHLHE41の発現を誘導させるとAIFM2の発現が減少した。同じ条件でBAXの発現も減少していることがわかった。そこでAIFM2の転写活性について検討しようとAIFM2のプロモーター領域のクローニングを行ったがなかなかうまくいかず思うように進まなかった。
同時並行でBHLHE41の標的候補遺伝子の一つでもあるBAXに焦点をあて、すでに作製してあったBAXのプロモーター領域のコンストラクトを用いて転写活性解析を行った。その結果、BHLHE41が発現するとBAXの転写活性が低下することがわかった。これはmRNAの発現と一致した結果でありBHLHE41がBAXを転写抑制的に制御していることが示唆された。そこで、この転写抑制が直接的なものかどうかクロマチン免疫沈降法を行ったところBAXプロモーター領域にBHLHE41が結合する部位があることがわかり、おそらくBAXプロモーター領域のE-BOXサイトに結合していることが示唆された。この結果からBHLHE41は直接的にBAXを制御していることがわかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
AIFM2のプロモーター領域のクローニングと過酸化脂質の定量の条件検討に時間を要してしまった。
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| Strategy for Future Research Activity |
まずAIFM2のプロモーター解析をするためにプロモーター領域のクローニングを終わらし、BHLHE41の発現によって変化するか検討する。
オートファジーやフェロトーシス関連因子のタンパク質発現変化について調べる。マイトファジーの関与も示唆されるのでマイトファジー関連因子の発現についても検討する。
BHLHE41の発現制御機構についてはまず転写因子のメチル化について注目し、脱メチル化剤の有無でBHLHE41のプロモーター活性に変化がみられるか検討する。
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| Causes of Carryover |
プロモーター領域のクローニングと過酸化脂質の条件検討の遅れにより研究計画がうまく進まなかったため。
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[Journal Article] Development of a highly sensitive method for the quantitative analysis of modified nucleosides using UHPLC-UniSpray-MS/MS2021
Author(s)
TakahiroKogaki,IkumiOhshio,HasumiUra,SoutaIyama,KaoriKitae,ToshiyaMorie,ShintarouFujii,ShoheiS ato,ToshiyukiNagata,AyaHarada- Takeda,MasayaAoki,KazuhiroUeda,KentaroMinami,MasatatsuYamamoto,KohichiKawahara,TatsuhikoFuruka wa,MasamiSato,YukoUeda,KentaroJingushi,ZenzaburoTozuka,DaisukeSaigusa,HiroakiHase,KazutakeTsuj
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Journal Title
Journal of pharmaceutical and biomedical analysis
Volume: 197
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] ALKBH4 promotes tumourigenesis with a poor prognosis in non-small-cell lung cancer.2021
Author(s)
Kentaro Jingushi,Masaya Aoki,Kazuhiro Ueda,Takahiro Kogaki,Masaya Tanimoto,Yuya Monoe,Masayuki Ando,Takuya Matsumoto,Kentaro Minami,Yuko Ueda,Kaori Kitae,Hiroaki Hase,ToshiyukiNagata,Aya Harada-Takeda,MasatatsuYamamoto,Kohichi Kawahara,Kazuhiro Tabata,Tatsuhiko Furukawa,Masami Sato,Kazutake Tsujikawa
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Journal Title
Scientific reports
Volume: 11
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] BHLHE41/DEC2 Expression Induces Autophagic Cell Death in Lung Cancer Cells and Is Associated with Favorable Prognosis for Patients with Lung Adenocarcinoma.2021
Author(s)
Toshiyuki Nagata, Kentaro Minami, Masatatsu Yamamoto, Tsubasa Hiraki, Masashi Idogawa, Katsumi Fujimoto, Shun Kageyama, Kazuhiro Tabata, Kohichi Kawahara, Kazuhiro Ueda, Ryuji Ikeda, Yukio Kato, Masaaki Komatsu, Akihide Tanimoto, Tatsuhiko Furukawa, Masami Sato
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Journal Title
International journal of molecular sciences
Volume: 22
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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