2023 Fiscal Year Annual Research Report
Analysis of transcriptional network for nuclear receptor involved in atherosclerosis suppression and its application for drug discovery
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21K06791
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| Research Institution | Fukuyama University |
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Principal Investigator |
松岡 浩史 福山大学, 薬学部, 准教授 (00527533)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
道原 明宏 福山大学, 薬学部, 教授 (10309635)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 動脈硬化 / 脂質代謝 / 核内受容体 / レチノイン酸受容体関連オーファン受容体 / トランスクリプトーム / アゴニスト / コレステロール / 天然化合物 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
動脈硬化の薬物治療において脂質降下薬が臨床現場で応用されている。しかし、これら薬剤は脂質降下作用により予防には効果的であるが、すでに蓄積された脂質の除去効果は十分でなく、新たな治療薬の開発が必要である。これまでに、我々は動脈硬化抑制に関わるRORα核内受容体の応答配列（RORE）のゲノムワイド検索を足掛かりとして、RORαの結合性と応答性を合わせ持つROREを有する標的遺伝子の同定に成功した。しかし、RORαを通じた制御ネットワークの全容は不明である。
本研究では、RORαの制御ネットワークの全容を明らかにするとともに、その制御系の活性化に対するRORαアゴニストの効果についても評価することで、動脈硬化治療を目指した標的分子の同定および動脈硬化に対する効果的な治療薬の開発を目的とする。
１．RORαの標的遺伝子群を選出するために、CRISPR-Cas9システムのPITCh-KIKO法を用いてRORα欠失細胞株を作成した。さらに、RORα欠失細胞株を用いたRNA-seq法およびqRT-PCR解析により、RORαの機能欠失にともなって発現減少するいくつかの標的遺伝子の選出に成功した。
２．RORαを活性化させるアゴニスト作用を評価するために、それらアゴニストの処理細胞を用いて標的遺伝子の発現誘導を解析した。結果、既知の合成アゴニストであるSR1078、天然物ノビレチンによる発現誘導が観察された。
３．アゴニストによるRORα活性化能を評価するために、HEK293細胞培養系によるルシフェラーゼレポーターアッセイ法を確立した。このアッセイ系により、RORαの標的遺伝子を発現誘導させる新規アゴニストを得た。
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