2022 Fiscal Year Research-status Report
DNA損傷トレランスタンパク質REV7を介した紫外線誘発皮膚癌の発生機序の解明
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21K06973
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| Research Institution | Kitasato University |
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Principal Investigator |
櫻井 靖高 北里大学, 医学部, 助教 (50733101)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
村雲 芳樹 北里大学, 医学部, 教授 (40324438)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | DNA損傷トレランス / 紫外線 / 変異 / 発癌 / REV7 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、紫外線が誘発する皮膚癌の発生にREV7が関与していることをマウス個体レベルで証明し、そのメカニズムを細胞・組織レベルで明らかにすることである。
本年度は細胞レベルの解析として、各種遺伝子型のケラチノサイト細胞株（野生型、Polh欠損型、Rev7欠損型、Polh/Rev7二重欠損型）に対して紫外線損傷に誘発される変異頻度の解析を行った。紫外線損傷が存在しない場合、変異頻度が低く、各種遺伝子型間で差は認められなかった。一方、紫外線損傷が存在する場合、すべての遺伝子型で変異頻度の上昇が見られた。その中で、Rev7欠損型細胞は野生型細胞よりも低い変異頻度を示した。また、Polh欠損型は野生型よりも高い変異頻度を示したが、Rev7を欠損させることで変異頻度が抑制された。このことから、野生型細胞やPolh欠損型細胞で誘発される変異にREV7が関与していることが示唆された。
個体レベルの解析として、Polh/Rev7二重遺伝子改変マウスの作出を行った。当初使用する予定だったRev7ホモ欠損マウスが胎生致死を示したため、コンディショナルノックアウト（cKO）マウスを用いることにした。皮膚特異的にREV7を欠損させるために、K5プロモーター下でCreを発現するトランスジェニックマウス（K5-Cre）を熊本大学生命資源研究・支援センターより入手した。これらのマウスの交配を進めることで、Polh/Rev7cKO/K5-Creマウスを作出し、紫外線照射に対する応答の解析を進める予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
皮膚特異的にCreリコンビナーゼを発現するマウスの樹立に失敗したため、他施設から入手することに変更した。入手手続きや発生工学、戻し交配などに計画外の時間になったため、当初計画よりもやや遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
Polh/Rev7cKO/K5-Creマウスを作出したのち、紫外線による発癌実験を行い、REV7欠損による皮膚癌発生への影響を解析する。また、発生した皮膚癌組織における変異スペクトラムの解析を進める。
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| Causes of Carryover |
予定していた実験計画、特に動物実験系がやや遅れているが次年度に行う予定であり、今後の使用計画に大きな支障はないと考えている。
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