2022 Fiscal Year Research-status Report
CBPシグナル経路阻害による肝線維症からの離脱及び肝細胞機能再生機序の解明
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21K06981
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| Research Institution | Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science |
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Principal Investigator |
小原 道法 公益財団法人東京都医学総合研究所, 疾患制御研究分野, 特任研究員 (10250218)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | β-catenin/CBP選択的阻害剤 / NASH / HCV-Tg |
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| Outline of Annual Research Achievements |
[目的] β-catenin/CBP選択的阻害剤PRI-724はHCVおよびHBVに起因する肝硬変患者を対象とした医師主導治験が進んでおり、新たな肝硬変治療薬として期待されている。非アルコール性脂肪肝炎 (NASH) は肝硬変、肝細胞がんへと進行する病態であり、患者数は日本のみならず世界で増加している。肝線維はNASHの予後を決定する因子であるが、現在、NASHに起因する肝線維症/肝硬変に対する治療薬は存在していない。本研究では、Wnt/β-カテニン/CBPシグナル阻害剤であるPRI-724の肝硬変治療効果についてその作用機序の解明を目指す。
[方法] C57BL/6J (オス, 6週齢) にコリン欠乏・メチオニン減量高脂肪食 (CDAHFD) を14週間与えることで作成したNASH誘発肝線維化モデルマウスにPRI-724 (20 mg/kgもしくは60 mg/kg) を6週間投与した。肝線維化はsirius red染色および鍍銀染色で、肝機能はプロトロンビン時間で評価した。肝臓内の各種遺伝子の発現は定量RT-PCRを用いて測定した。さらに肝臓内リンパ球を分離後、FACSおよびシングルセルRNA-seqを用いて解析を行った
[結果および考察] PRI-724が示す抗肝線維症活性については、肝線維の減少効果と肝細胞の正常化効果の両面から解析する。PRI-724投与マウスの肝臓を用いたscRNA-seq解析によりPRI-724投与による肝線維の減少に関与するMmp9を発現する細胞群として、Cd68+Marco+ クッパー細胞を同定した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
PRI-724を投与したときに肝臓中に増加するマクロファージ・単球および好中球の一部が線維分解酵素産生を担うと考えられ、誘導機序の解析を行った。この成果は2022年に開催された米国肝臓学会において発表した。
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| Strategy for Future Research Activity |
NASHマウスで同定したCd68+Macro+クッパー細胞におけるMMP9の発現亢進をタンパク質レベルで確認するとともに、Cd68+Marco+ MMP9+クッパー細胞が肝線維化軽減に直接寄与しているか否かを検証するために、抗MARCO中和抗体や肝臓標的siRNAなどを用いてCd68+Marco+ MMP9+クッパー細胞の機能抑制や排除による影響を解析する。更に、非アルコール性脂肪肝炎（NASH）とHCV感染由来肝硬変での治療効果と作用因子の差異についても検証する。
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| Causes of Carryover |
NASHモデルマウスの給餌期間を14週としていたが、肝障害の程度が弱いことがわかってきたのでさらに32週間、48週間の給餌を行って最適のモデルマウス作製を試みた。このために解析費用の支出が抑えられた。解析の結果、48週間の給餌がモデルとして最適である事がわかったので、残金を解析に使用する試薬購入費用に宛て、来年度に向けて研究を進める。
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[Presentation] A CBP/β-catenin signaling inhibitor, PRI-724 ameliorates NASH-induced liver fibrosis and disorder2022
Author(s)
Yamaji K, Tokunaga Y, Iwabuchi S, Hashimoto S, Yamane D, Toyama S, Kitab B, Kimura K, Tsukiyama-Kohara K, Kohara M.
Organizer
AASLD The Liver Meeting 2022
Int'l Joint Research
