2023 Fiscal Year Annual Research Report
Post-transcriptional regulation by CCCH-type zinc finger family of Plasmodium parasites
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21K06985
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
新澤 直明 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 講師 (10583015)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | マラリア / 転写後制御 / ゲノム編集 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
マラリア原虫のステージ形成に必要な秩序立ったタンパク質発現には、発現遺伝子群の転写活性化に続くRNAの翻訳、安定化・分解などの転写後調節機構が必須である。本研究では、各ステージ形成に共通する転写後調節機構の基本原理を明らかにするため、原虫生活環全体にファミリー分子が存在し、マラリア原虫種間に高い保存性を持つTZFファミリーに着目した。新規標的RNA同定法であるTRIBE法と革新的ゲノム編集法の2つを基盤技術として、TZFファミリーの機能を明らかにすることで転写後調節機構の共通原理の解明を目指す。雌生殖母体の翻訳抑制機構を担うRNAヘリカーゼであるDOZIをモデルとしてTRIBE法の確立を行った。免疫沈降を利用したRIP-seqとTRIBE法の比較を行い、手法が簡便なTRIBE法においても十分な検出感度を有することを示した。この手法を複数のTZFに適用した結果、非特異的なmRNA編集が多数起こり、TRIBE法では十分に標的RNAの解析ができなかった。TRIBE法は利用できるRNA結合タンパク質に選択性があることが懸念された。一方で、無性増殖期と有性生殖期のTZFについて蛍光タンパク質mNeonGreenによる融合遺伝子発現株の作出を行った。研究開始前の予備解析で作出していたGFP融合遺伝子発現株に比べて、より明るい蛍光を示すこれらの株で詳細な発現時期と細胞内局在の解析を行った。蛍光観察の結果、多くのTZFは細胞質においてドット状に発現することが明らかになった。ドット状の発現パターンは、P-bodyやストレス小胞のような無膜オルガネラであることが予想され、TZFファミリーは翻訳抑制複合体と関わることが予想された。
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