2023 Fiscal Year Annual Research Report
Identification of host factors interacting with acetylated influenza A virus
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21K07058
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| Research Institution | Tokushima Bunri University |
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Principal Investigator |
畠山 大 徳島文理大学, 薬学部, 准教授 (20514821)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | インフルエンザウイルス / NP / アセチル化修飾 / インタラクトーム解析 / PA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は，インフルエンザウイルスのNPに対するアセチル化修飾の生物学的意義を解明することを目的とし，アセチル化されたNPとの相互作用因子を網羅的に解析するものである．手法としては，NPの組換えタンパク質を用いて実験を行うが，本研究室で従来行ってきた大腸菌で組換えタンパク質を作製する方法では，発現させている過程でNPがアセチル化修飾を受けてしまう．そこで，無細胞系組換えタンパク質合成キットであるPUREflexで合成を行った．実験の結果，抗NP抗体を用いたウェスタンブロッティングにより，PUREflexによる発現に成功したことを確認した．しかし，抗アセチル化リジン抗体を用いた解析では，アセチル化酵素と反応させていないにも関わらず，シグナルが確認されてしまった．PUREflexには，アセチル化酵素の類は一切含まれていないことから，抗体の非特異的結合であると考えられる．現在，様々な手法により，アセチル化修飾の有無を確認している最中である．
また，インフルエンザウイルスPAの19番目のリジン（K19）がアセチル化され，それによってPAエンドヌクレアーゼ活性が増強されることを報告したが，その後の解析により，K19以外の2か所のリジンもアセチル化修飾されている可能性が示唆された．そこで，これらのリジン残基をアルギニンまたはグルタミンに変異させた組換えタンパク質を作成し，変異に伴うアセチル化レベルの解析を行った．その結果，2か所のうちの1か所をアルギニンへの変異により，アセチル化レベルが有意に減少することを明らかにした．今後は，もう1つのリジン，およびK19も含めた複数個所のリジンを変異させた組換えタンパク質も順次作成し，アセチル化レベルの変化やエンドヌクレアーゼ活性への影響を詳細に解析していく予定である．
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