2023 Fiscal Year Research-status Report
Development of liquid biopsy technology targeting DNA methylation for prostate cancer diagnosis
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21K07211
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
福重 真一 東北大学, 医学系研究科, 特任教授 (90192723)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
三塚 浩二 東北大学, 医学系研究科, 非常勤講師 (80568171)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | 癌 / ゲノム / 遺伝子 / 前立腺癌 / DNAメチル化 / リキッドバイオプシー / cfDNA / ZNF750 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、1) 前立腺癌における4種の高メチル化遺伝子（PYCARD、ZNF750、SLC30A2、IRX1）の腫瘍形成における役割を解明すること、2)これら4種のDNAメチル化を標的とするリキッドバイオプシー技術を開発し、前立腺癌の早期診断への可能性や予後との関連を調べることを目的とした。
昨年度は、前立腺癌の癌抑制遺伝子候補、ZNF750が２つの下流遺伝子TWIST1、PTPRBプロモーターの転写を制御するのかどうかを明らかにするためルシフェラーゼアッセイを行った。TWIST1、PTPRB遺伝子の転写開始点上流1kbを用いた結果はPTPRB転写開始点上流1kbにはZNF750の発現によりルシフェラーゼ活性を亢進する領域が認められた。一方、TWIST1転写開始点上流1kbにはZNF750の発現によりルシフェラーゼ活性を変化させる領域は認められなかった。
リキッドバイオプシーに関しては、前立腺癌26症例（早期がん：16症例、転移癌：10症例）、前立腺癌以外の疾患として副腎腫瘍11症例の血清からcfDNAを回収し、バイサルファイト処理後、PYCARD、ZNF750、SLC30A2、IRX1遺伝子領域のメチル化特異的PCR（MSP）解析を行ったが、DNA収量が少なく、いずれも結果を得ることができなかった。そのため、メチルCpG結合蛋白による免疫沈降を用い、メチル化cfDNAを濃縮後、増幅する方法によりこの問題を解決することにし、予備的検討を行った。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
当初予定していたリキッドバイオプシーのメチル化解析が上手くいかず、新しい方法を確立するのに時間がかかったため。
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| Strategy for Future Research Activity |
リキッドバイオプシーに関して、メチル化cfDNA断片をメチルCpG結合蛋白で濃縮した後、増幅する方法によりPYCARD、ZNF750、SLC30A2、IRX1遺伝子領域のメチル化解析を行う。
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| Causes of Carryover |
理由：cfDNAのメチル化解析が当初の手法では上手くいかなかったため、新しい手法を確立する必要があった。消耗品購入を変更したことにより、本年度中での使用ができなかった。
使用計画：細胞株保存のための液体窒素やリキッドバイオプシー解析などの消耗品に使用する予定である。
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