2022 Fiscal Year Research-status Report
Impact of cysteine modifications of apolipoprotein E on the remnant lipoprotein metabolism
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21K07310
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| Research Institution | Shinshu University |
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Principal Investigator |
山内 一由 信州大学, 学術研究院保健学系, 教授 (70419414)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | apo E / Cys-thiol 基 / レドックス変化 / LRP1 / ヒト繊維芽細胞 / 蛍光標識エマルジョン / Syndecan-1 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度当初は前年度に引き続き、種々の酸化還元修飾を加えたapoEをコーティングしたプレートにおけるLRP-1高発現ヒト線維芽細胞（GM00701)の接着性により、LRP1とapoEの相互作用に及ぼすapoE-Cys-thiol基のレドックス変化の影響を検討してきたが、本実験系では再現性のあるデータが得られず有意差の有無を的確に評価できなかった。そこで、本年度はapoE含有蛍光標識TG-richエマルジョン粒子(apoE-F-EP)を作製し、これをGM00701の培養液に添加して、apoE-F-EPの細胞との結合性、培養液からのクリアランス能、および異化能について蛍光強度を指標として、1) apoEアイソフォームの影響と、2) apoE-Cys-thiol基のレドックス変化の影響について検討を行ってきた。1）については、① apoE3-F-EPは主要な3種類のアイソフォームの中で最も効果的にLRP1に結合して異化されるのに対し、② apoE4-F-EPはapoE3-F-EPとほぼ同等のLRP1との結合性を有していながらも細胞内に取り込まれて異化される能力が最も低いこと、また、③ apoE2-F-EPの親和性はapoE3-F-EPおよびapoE4-F-EPの約70％と最も低いが、LDL受容体に対する親和性と比べると十分認められ、むしろapoE4-F-EPより十分な異化能が認められることを明らかにした。2）については、① TCEP還元はapoE3-F-EPとLRP1との結合性を増強する一方で異化能を抑制するが、apoE2-F-EPには影響しないこと、② apoAIIとのジスルフィド結合はapoE2-F-EPとLRP1との結合性を抑制する一方で異化能を促進することを明らかにした。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
① apoE含有蛍光標識TG-richエマルジョン粒子(apoE-F-EP)を用いた実験系を構築することができ、それにより② LRP1とapoEとの相互作用に及ぼすアイソフォームとCys-thiol基のレドックス変化の影響を精度よく評価することができ、③その結果を英語論文に纏め投稿することができた（査読中）。
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| Strategy for Future Research Activity |
LRP1のco-receptorとして機能しているSyndecan1（SDC1）とapoEとの相互作用およびLRP1とSDC1の協調作用に及ぼすにapoEのCys-thiol基のレドックス変化の影響について焦点を絞って研究を遂行する。すなわち、① solid-binding assayによりSDC1とapoEの結合性に及ぼすapoEアイソフォームとCys-thiol基のレドックス変化の影響を検討するとともに、② LRP1高発現細胞（LRP1+/SDC-）とLRP1/SDC1高発現細胞株（LRP1+/SDC1+）を用いてapoE-F-EPの結合性、クリアランス能、および異化能について解析を行う。
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Research Products
(1 results)
