2022 Fiscal Year Research-status Report
DUX4による非コードDNAの転写活性化の病理的意義の研究
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21K07426
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| Research Institution | Tokai University |
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Principal Investigator |
三橋 弘明 東海大学, 工学部, 准教授 (20466220)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
三橋 里美 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (40466222)
中川 草 東海大学, 医学部, 准教授 (70510014)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 非コードDNA / DUX4 / FSHD |
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| Outline of Annual Research Achievements |
顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー(FSHD)は常染色体優性遺伝の筋疾患で、筋細胞の壊死と自己免疫疾患にも似た炎症所見を特徴とする。FSHD患者の筋肉では、健 常者には発現していない転写因子DUX4-flが発現しており、このDUX4-flの異所的な発現がFSHDの原因と考えられている。我々はDUX4-flが遺伝子領域以外にも 「非コードDNA」である様々な反復配列(ERV, サテライトDNA, LINE, Alu, MaLR等)からの転写を誘導していることを明らかにしてきた。しかし、その完全長配 列の同定には至っておらず、それら反復配列の発現と疾患との関係もまだ明らかになっていない。そこで本研究ではDUX4-flにより発現誘導される非コードDNAを 完全に明らかにし、FSHD病態との関連を探ることを目的としている。令和４年度はDUX4-fl, DUX4-s発現細胞におけるdsRNAの存在頻度を免疫染色によって調べた。また、dsRNAに対する細胞内応答系の１つであるPKRの活性化についてウェスタンブロットで検討した。dsRNAの形成を阻害するためのGapmerをデザインし合成した。また、非コードDNAからの転写産物が翻訳されている可能性を探るため、DUX4-fl, DUX4-s発現細胞のRNAを用いてRibosomel profilingをおこなった。これまでにおこなったロングリードRNA-seqのデータとRibosome profilingのデータを合わせて解析し、翻訳された場合の機能ドメインの検索などをデータベース解析した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
DUX4-flによって誘導されるdsRNAに関する実験が予定通りおこなうことができたため。
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| Strategy for Future Research Activity |
Ribosome profilingのデータを解析して翻訳の可能性がある非コードDNAについて研究を進めていく。また、病態への関与が疑われる非コードDNAについて、患者iPS細胞での発現の有無を確認していく。
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| Causes of Carryover |
予定していたqPCR解析を今年度中におこなえなかったために次年度使用額が生じた。この分は来年度にqPCR解析を行うことで使用する。
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