2022 Fiscal Year Research-status Report
Elucidation of the pathophysiology of hyperacusis and development of treatment methods by functional analysis of the autism-related gene CNTN5
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21K07496
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
江川 純 新潟大学, 医歯学総合研究科, 特任准教授 (80648527)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
霜田 靖 長岡技術科学大学, 工学研究科, 准教授 (00291154)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 自閉スペクトラム症 / Contactin5 / ハイコンテントスクリーニング / 聴覚過敏 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Contactin5 (CNTN5)は、聴覚系において脳幹のグルタミン酸作動性ニューロンの発達に関与し、CNTN5 KOマウスで聴覚脳幹反応（ABR）の脳波潜時が延長していた(Toyoshima et al., Dev Biol, 2009) 。また、CNTN5および6の遺伝子変異を持つ自閉スペクトラム症 (Autism Spectrum Disorder; ASD)患者は聴覚過敏を持ち、ABRの脳波潜時の延長を認めた(Mercati et al., Mol Psychiatry, 2016)。CNTN5の全エクソンをカバーするように設計した22個のプライマーを用いて、ASD患者のDNAサンプルのexon sequenceをABI PRISM 3130 x l Genetic Analyzerで行う。ASD群で検出された変異についてTaqman法で健常コントロール群に存在するかを確認して、症例対照で頻度を比較する。それらの変異についてin silico解析でその変異の有害度を推測した。これまでに8個のミスセンス変異が同定されたが、そのうち２つ（rs778655565, rs186615197, rs771277271,rs757538847）がin silico解析（PolyPhen-2）によりDamagingと判定された。この4種の変異Cntn5-Fc融合タンパク溶液を作成し、培養神経細胞に添加して、その神経発達における影響を解析している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
COVID-19の影響によりシークエンス試薬やシークエンサー備品の輸送が遅れたため。
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| Strategy for Future Research Activity |
CNTN5のエクソンシークエンスにより同定されたミスセンス変異のうち、in silico解析により有害と判定された変異をプラスミドベクターを用いて培養神経細胞に導入して、神経突起長解析では3日間、シナプス解析では2週間、培養したのちに固定して、染色（神経突起マーカー：MAP2、前シナプスマーカー：Synaprophysin1、後シナプスマーカー：SHANK2）、細胞イメージアナライザー（CellInsight CX5）で神経突起長およびシナプス数を自動計測し、コントロールとそれぞれの濃度の平均値をt検定で比較。多重比較の補正（Bonferroni法）を行う。
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| Causes of Carryover |
VID-19の影響によりシークエンス試薬の輸送が遅れ、次年度の支払いとなったため
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