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2022 Fiscal Year Research-status Report

Comprehensive analysis of radiation-response miRNA for cell-to-cell communication

Research Project

Project/Area Number 21K07642
Research InstitutionKobe University

Principal Investigator

小林 加奈  神戸大学, 医学部附属病院, 助教 (70433282)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 佐々木 良平  神戸大学, 医学部附属病院, 教授 (30346267)
椋本 成俊  神戸大学, 医学部附属病院, 特命助教 (70634278)
清水 康之  神戸大学, 医学部附属病院, 特命技術員 (80824234)
岩下 和真  神戸大学, 医学部附属病院, 医員 (80850065)
Project Period (FY) 2021-04-01 – 2024-03-31
Keywordsエクソソーム / 膵臓がん / 放射線応答
Outline of Annual Research Achievements

細胞・細胞間の放射線応答を予測するエクソソーム由来miRNAの網羅的解析を実施した。エクソソームは近年最も注目されている細胞・細胞間情報伝達を行う細胞外小嚢胞であるが、その主たる機能は、miRNAを介して調整される。放射線照射をうけたがん細胞が、どのようなエクソソーム由来miRNAを放出するか、そのレシピエント細胞がどの細胞で、生体内でどのような反応をするかといった放射線応答を、培養上清からのエクソソームを用いて解析した。また、インビボでの放射線照射を受けたがん細胞から放出されるエクソソームの機能や、エクソソームの細胞や臓器指向性、エクソソームの機能を維持できる時間を解析することで、① 照射を受けたがん細胞が、エクソソームを介してどのような情報伝達をするのか、② 照射がん細胞から放出されるエクソソームの体内動態や臓器指向性は、③ 照射線量と放出されるエクソソームmiRNAの関連は、を検討した。特に本年度は、インビボでの膵がん細胞の肝転移動物モデルの構築に取り組み、放射線照射されたMIAPaCa-2細胞由来のエクソソームを添加した細胞を用いると、肝転移巣形成モデルマウスにおける肝転移巣形成が抑制されることに加え、migration assayの結果から、細胞から放出されたエクソソームが細胞の遊走能を低下させることを明らかにした。これらの結果を踏まえ、エクソソームのマイクロアレイ解析結果から、非照射細胞由来のエクソソームと比較し、照射を受けた細胞由来のエクソソームの方が有意に発現量が変化しているマイクロRNAを数種同定し、遊走能、転移能制御の関連候補分子として抽出した。これらの結果からはエクソソームは細胞の遊走脳や転移能に対しても調整を行っている可能性を示した。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

我々は独自に開発した肝転移形成モデルマウスを用いたエクソソームによる肝転移形成制御実験結果、および、エクソソームの添加によるMIAPaCa-2細胞の遊走能変化の検討実験を通して、細胞の遊走能および転移能制御に関連するマイクロRNAの候補を抽出することができ、当初の実験計画と比較してもおおむね順調である。今年度の実験では、これらの効果の細胞種依存性の有無の検討に加え、抽出したマイクロRNAに着目しターゲット分子を同定することで、エクソソームの細胞遊走能・浸潤能および転移巣形成制御の分子機序の詳細な検討を行う予定である。

Strategy for Future Research Activity

エクソソームが浸潤能に与える効果についても検討を行うため、MIAPaCa-2細胞に対してinvasion assayを行う。非照射細胞と比較して照射細胞由来のエクソソーム内にて有意に発現量が変化したマイクロRNAのmimicを細胞にtransfectionさせ、細胞の遊走能・浸潤能変化を検討し、細胞の遊走能・浸潤能を最も低下させたマイクロRNAを検索する。検索したマイクロRNAのターゲット分子をTargetScanやmiRtarbaseなどのデータベースを用いて同定し、マイクロRNAによる細胞内でのターゲット分子の発現量変化を生化学的手法で解析する。さらに、エクソソームによる細胞の遊走能・浸潤能制御の効果が、細胞種に依存的か否かをBxPC3やPanc-1などの細胞株を用いて同様の実験を行うことで検討する。分子機構の検討において、必要であれば、同定した関連分子を過剰発現/ノックアウトした膵がん細胞株をヌードマウスの脾臓へ注入して肝転移形成マウスモデルを作成し、解剖後に取り出した脾臓および肝臓組織に対し、HE染色および免疫染色を行い、腫瘍形成率や生存率等の解析を行うこととする。

Causes of Carryover

肝転移形成モデルマウスを用いたエクソソームによる肝転移形成制御実験結果およびエクソソームの添加によるMIAPaCa-2細胞の遊走能変化の検討実験を通して、細胞の遊走能および転移能制御に関連するマイクロRNAの候補を抽出することができ、当初の実験計画と比較してもおおむね順調である。今年度の実験では、これらの効果の細胞種依存性の有無の検討に加え、抽出したマイクロRNAに着目しターゲット分子を同定することで、エクソソームの細胞遊走能・浸潤能および転移巣形成制御の分子機序の詳細な検討を行う予定である

  • Research Products

    (8 results)

All 2022

All Journal Article (6 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Peer Reviewed: 6 results,  Open Access: 2 results) Presentation (2 results)

  • [Journal Article] Reactive oxygen species-inducing titanium peroxide nanoparticles as promising radiosensitizers for eliminating pancreatic cancer stem cells2022

    • Author(s)
      Salah Mohammed、Akasaka Hiroaki、Shimizu Yasuyuki、Morita Kenta、Nishimura Yuya、Kubota Hikaru、Kawaguchi Hiroki、Sogawa Tomomi、Mukumoto Naritoshi、Ogino Chiaki、Sasaki Ryohei
    • Journal Title

      Journal of Experimental & Clinical Cancer Research

      Volume: 41 Pages: 146

    • DOI

      10.1186/s13046-022-02358-6

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] The <i>TIGD5</i> gene located in 8q24 and frequently amplified in ovarian cancers is a tumor suppressor2022

    • Author(s)
      Dai Yuntao、Kawaguchi Tetsuya、Nishio Miki、Otani Junji、Tashiro Hironori、Terai Yoshito、Sasaki Ryohei、Maehama Tomohiko、Suzuki Akira
    • Journal Title

      Genes to Cells

      Volume: 27 Pages: 633~642

    • DOI

      10.1111/gtc.12980

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Clinical Outcome of Patients with Pelvic and Retroperitoneal Bone and Soft Tissue Sarcoma: A Retrospective Multicenter Study in Japan2022

    • Author(s)
      Takemori Toshiyuki、Kawamoto Teruya、Hara Hitomi、et al.
    • Journal Title

      Cancers

      Volume: 14 Pages: 3023~3023

    • DOI

      10.3390/cancers14123023

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] <i>In vivo</i> stealthified molecularly imprinted polymer nanogels incorporated with gold nanoparticles for radiation therapy2022

    • Author(s)
      Kitayama Yukiya、Yamada Takuya、Kiguchi Kentaro、Yoshida Aoi、Hayashi Shuhei、Akasaka Hiroaki、Igarashi Kazunori、Nishimura Yuya、Matsumoto Yu、Sasaki Ryohei、Takano Eri、Sunayama Hirobumi、Takeuchi Toshifumi
    • Journal Title

      Journal of Materials Chemistry B

      Volume: 10 Pages: 6784~6791

    • DOI

      10.1039/d2tb00481j

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Space-Making Particle Therapy for Unresectable Hilar Cholangiocarcinoma2022

    • Author(s)
      Hashimoto Yu、Komatsu Shohei、Terashima Kazuki、Tsugawa Daisuke、Yanagimoto Hiroaki、Suga Masaki、Demizu Yusuke、Tokumaru Sunao、Okimoto Tomoaki、Sasaki Ryohei、Ajiki Tetsuo、Fukumoto Takumi
    • Journal Title

      Digestive Surgery

      Volume: 39 Pages: 99~108

    • DOI

      10.1159/000524582

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Fiducial marker position affects target volume in stereotactic lung irradiation2022

    • Author(s)
      Akasaka Hiroaki、Mizonobe Kazufusa、Oki Yuya、Uehara Kazuyuki、Nakayama Masao、Tamura Shuhei、Munetomo Yoshiki、Kawaguchi Haruna、Ishida Jun、Harada Aya、Ishihara Takeaki、Kubota Hikaru、Kawaguchi Hiroki、Sasaki Ryohei、Mayahara Hiroshi
    • Journal Title

      Journal of Applied Clinical Medical Physics

      Volume: 23 Pages: e13596

    • DOI

      10.1002/acm2.13596

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 同一腫瘍細胞間の放射線応答を制御するエクソソーム内マイクロRNAの網羅的解析2022

    • Author(s)
      中岡 藍、仲波名 真希子、椋本 成俊、赤坂 浩亮、清水 康之、Mohammed Salah 、西川 遼、平野 駿太、石原 武明、宮脇 大輔、佐々木 良平
    • Organizer
      第58回日本放射線腫瘍学会生物部会学術大会
  • [Presentation] 膵がん細胞由来のエクソソームを介した肝転移制御効果に関する基礎的検討2022

    • Author(s)
      中岡藍、仲波名真希子、清水康之、金城裕士、椋本成俊、小林加奈、石原武明、宮脇大輔、佐々木良平
    • Organizer
      第9回日本細胞外小胞学会学術集会

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Published: 2023-12-25  

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