Construct of realtime DNA damage-repair responce detention system and analysis of intratumor DNA damage-repair responce

2023 Fiscal Year Final Research Report

• Project/Area Number: 21K07727
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Section: 一般
• Review Section: Basic Section 52040:Radiological sciences-related
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: Kobayashi Minoru 京都大学, 生命科学研究科, 特定助教 (40644894)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 原田 浩 京都大学, 生命科学研究科, 教授 (80362531)
• Project Period (FY): 2021-04-01 – 2024-03-31
• Keywords: DNA損傷修復

Outline of Final Research Achievements

In this study, I try to construct assay system for detection of DNA damage repair responses using split luciferase fused with DNA damage response protein. First, I used firefly luciferase-based split luciferase system, but I had problem to unexpected response such as temperature and non-specific drug-dependent luminescence increment. So, I changed split luciferase system from firefly luciferase-based system to NanoLuc-based NanoBit system and I succeeded reduce unexpected response. Now I continue to develop convenient DNA-damage response-detection system using NanoBit-based split luciferase for much convenience.

Free Research Field

分子生物学

Academic Significance and Societal Importance of the Research Achievements

これまでDNA損傷修復活性を定量する方法は限られており、経時的・定量的な解析が困難であった。そこで、本研究では定量性に優れ、細胞や動物個体を殺さずに検出可能な発光タンパクであるルシフェラーゼを基にした分割ルシフェラーゼ系を用いてDNA損傷や修復活性を検出する系の構築を試みた。
当初予定していたホタルルシフェラーゼを基にした系では非特異的な反応の影響が大きかったため、NanoLucを基にしたNanoBitに系を変更することで非特異的な反応を低減したDNA損傷修復活性検出系の構築の礎を築いた。今後この系をさらに発展させていく予定である。