2022 Fiscal Year Research-status Report

Investigation of leukemogenic mechanism of intractable pediatric leukemia

Research Project

Project/Area Number	21K07759
Research Institution	Kyoto Prefectural University of Medicine
Principal Investigator	今村俊彦京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (30444996)
Project Period (FY)	2021-04-01 – 2024-03-31
Keywords	ALL / AML / 分子標的薬 / レトロウイルス / NUP98::NSD1 / SPAG9::JAK2 / ETV6::FRK
Outline of Annual Research Achievements	高リスクB-ALL患者より同定したSPAG9::JAK2融合遺伝子をdoxycycline依存性に発現するBa/F3細胞を作成し、STAT1の恒常的リン酸化が、SPAG9::JAK2の細胞増殖活性に重要である事を明らかにし、BCL2およびMCL1阻害剤がJAK2阻害剤と相乗的に作用し、SPAG9::JAK2の細胞増殖活性を抑制する事をin vitroで証明した（Mayumi A, Imamura T. Cancer Gene Ther 2022 doi: 10.1038/s41417-022-00511-z) 。また、高リスクB-ALL患者より同定したETV6::FRK融合遺伝子を、doxycycline依存性に発現するBa/F3細胞を作成し、細胞増殖活性にSTAT1, STAT3, STAT5の恒常的リン酸化が関係する事を明らかにし、dasatinibがETV6::FRKを導入したBa/F3細胞の増殖を抑制する事を、in vitroおよびin vivoの実験系で証明した（Mayumi A, Imamura T, et al. eJHeam 2023 DOI: 10.1002/jha2.701)。さらに、難治性AMLの発症と関連するNUP98::NSD1融合遺伝子の機能解析のため、恒常的にNup98::Nsd1を発現する32D細胞を作成し、作成した細胞の発現アレイ解析や表面マーカー解析を行い、Nup98::Nsd1が32D細胞のCD123(IL3RA)の発現を誘導し、IL-3存在下での細胞増殖活性が上昇する事を明らかにし、標的治療の可能性を示した（Okamoto K, Imamura T, et al. Int J Hematol 2023 in press) 。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason B-ALLで同定したSPAG9::JAK2, ETV6::FRK、および難治性AMLに関連するNup98::Nsd1について、Ba/F3細胞および32D細胞に上記遺伝子を導入し、安定発現細胞株を樹立し、遺伝子発現の変化を網羅的に解析する事ができた。また、SPAG9::JAK2, ETV6::FRKについては、その増殖活性を押さえる事が可能な分子標的薬を複数同定し、その有効性をin vitroならびにin vivoで確認する事ができた。
Strategy for Future Research Activity	今後は、研究テーマとして掲げている難治性AMLの発症に関連するFUS::ERGについて解析を進める予定である。
Causes of Carryover	次年度消耗品購入に充填する。