2022 Fiscal Year Research-status Report
Development of detection method for multiple disease-causative proteins using dried blood spots
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21K07877
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| Research Institution | Kazusa DNA Research Institute |
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Principal Investigator |
中島 大輔 公益財団法人かずさDNA研究所, ゲノム事業推進部, 研究員 (30370935)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
川島 祐介 公益財団法人かずさDNA研究所, ゲノム事業推進部, ユニット長 (30588124)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 乾燥ろ紙血 / 新生児スクリーニング / プロテオーム解析 / LC-MS / 炭酸ナトリウム沈殿 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
乾燥ろ紙血から抽出した蛋白質に特化した高深度プロテオーム解析法の開発を行った。血液蛋白質はこれまで解析してきた培養細胞や生体組織と蛋白質の種類や濃度のダイナミックレンジが大きく異なるためシステムを再構築する必要がある。LC-MSのLCシステムについては、カラム充填剤の種類、カラム長、流速などを最適化した。MS部分についてはより多くの乾燥ろ紙血蛋白質を観測する為のイオン化法の改良、DIA法のMSレンジ、Isolation window幅、フラグメントイオンの蓄積時間などのパラメーターやノイズ除去の為のイオンモビリティーの電圧条件を最適化した。またin silico蛋白質同定用データベースを構築することにより、最終的に1検体1測定により乾燥ろ紙血から500以上の疾患原因蛋白質を含む3,000以上の蛋白質の同定・定量することができた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
炭酸ナトリウム沈殿法によって乾燥ろ紙血から抽出した蛋白質を最適化したLC-MS条件および蛋白質同定法を用いて解析することにより、ワンショットのLC-MS分析で500以上の疾患原因蛋白質を含む3,000以上の蛋白質の同定・定量することができた。
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| Strategy for Future Research Activity |
注目した疾患原因蛋白質の定量に用いる安定同位体標識ペプチドを作成する。大腸菌由来の無細胞発現系と多重共発現系を組み合わせできるだけ多種類の安定同位体標識ペプチドを一斉に作成する。最後に乾燥ろ紙血から抽出した蛋白質にスパイクインし、実際に疾患原因蛋白質が精度よく安定的に定量できることを確認する。
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