2021 Fiscal Year Research-status Report
Role of long noncoding RNA in the pulmonary artery hypertension
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21K08033
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
前村 浩二 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 教授 (90282649)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
池田 聡司 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 講師 (10336159)
江口 正倫 長崎大学, 病院(医学系), 助教 (70585405)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 肺高血圧症 / 長鎖ノンコーディングRNA / バイオマーカ / 低酸素 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
肺動脈性肺高血圧症（PAH）は予後不良の病態であり、早期診断のためのバイオマーカや新しい機序の治療薬の開発が喫緊の課題である。ヒトゲノムのうちタンパク質をコードしないRNAであるノンコーディングRNAの役割が注目されており、その中で長鎖ノンコーディングRNA(lncRNA)は、様々な病態に関与していることが明らかになりつつある。特にlncRNAはそのエピジェネティックな効果により、様々な病態に関与していることが明らかになっており、PAHの成因の1つとしてエピジェネティックな変化が関与していることより、lncRNAがPAHの病態にも関与している可能性が高い。
そこで本研究ではまずPAH症例の血液を用いて網羅的なスクリーニングを行い、血液中で上昇し、さらに肺循環で増加するlncRNAを探索し、PAHのバイオマーカとしての有用性を検証する。次にPAH動物モデルを用いて、当該lncRNAの発現動態を解析し、PAHの発症や悪化のメカニズムとの関連性を解明し、当該lncRNAをターゲットとした治療法の可能性を検討することを計画した。
本年度は当院にてPAHが疑われ、右心カテーテル検査が行われた症例の中で、患者の同意の下に肺動脈と左心室から採取して保存している血液サンプルを用いてlncRNA量を網羅的に測定を試みた（RT2 lncRNA PCR Array; QIAGEN社）。コントロールとしては、PAHが疑われて右心カテーテル検査を行ったが、PHのなかった患者の検体を用いた。しかし保存した血液の状態が良くなかったためかlncRNAの測定ができず結果を得られなかった。再度臨床研究倫理委員会に申請し直して新たに患者の血液を採取して測定を行う予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
今年度は当院でPAHが疑われ、右心カテーテル検査が行われた症例の保存血液サンプルを用いてlncRNA量を網羅的に測定し、①PAH患者では肺循環で上昇する（肺動脈より左心室で高値）、②コントロール患者では肺循環で変化しない、③コントロール患者に比較してPAH患者で高値、の3つ条件を満たすlncRNAをスクリーニングする予定であった。しかしlncRNAの測定が予定通りできず当初の結果が得られていないためやや遅れていると評価した。
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| Strategy for Future Research Activity |
１）再度臨床研究倫理委員会に申請して、PAHが疑われ、右心カテーテル検査が行われたPAH患者の肺動脈と左心室から血液を患者の同意の下に新たに採取している。その検体を用いてlncRNA量を網羅的測定を行う予定である。その結果から、①PAH患者では肺循環で上昇する（肺動脈より左心室で高値）、②コントロール患者では肺循環で変化しない、③コントロール患者に比較してPAH患者で高値、の3つ条件を満たすlncRNAをスクリーニングする。当該lncRNAの左心室/肺動脈比をとって肺循環での変化率を計測し、右心カテーテル検査で得られた平均肺動脈圧や肺血管抵抗との相関性を検討し、バイオマーカとしての有用性を検討する。さらに他のPAH患者の血液サンプルを用いて、該当lncRNAがPAHの診断マーカとして妥当かを検証する。
２）PAHの動物モデルを用いて、１）で同定されたlncRNAが肺組織やその他の臓器で発現が変化するか確認し、血中のlncRNAの量と相関するか検討する。
３）肺動脈平滑筋細胞や肺動脈内皮細胞を用いて、PAHの増悪因子であるendothelin-1、Platelet Derived Growth Factor (PDGF)、TGF-β、低酸素などで刺激し、1)で同定されたlncRNAの発現の変化を検証する。また、培養上清中のlncRNAを評価し、細胞伝達媒体としての可能性を評価する。さらにlncRNAを細胞内に導入、あるいは、siRNAを用いlncRNAを阻害し、細胞の増殖能やアポトーシスなどを評価し、PAHの治療法としての可能性を検討する。
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