レチノイン酸によるマクロファージ・パイロトーシス制御機構

2022 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 21K08433
• Research Institution: Hirosaki University
• Principal Investigator: 平賀 寛人 弘前大学, 医学研究科, 准教授 (80637546)
• Project Period (FY): 2021-04-01 – 2024-03-31
• Keywords: レチノイン酸 / ビタミンA / マクロファージ / パイロトーシス

Outline of Annual Research Achievements

VADマウスでは腸炎モデル・感染モデルのいずれにおいても宿主抵抗性が減弱しており、ビタミンAがマクロファージのパイロトーシスに及ぼす影響と炎症性腸疾患の病因・病態に関与している可能性に着目し、本研究を進めている。当該年度に実施した研究の成果は下記の通りである。
①VADマウスの作製：妊娠雌をビタミンA欠乏食（オリエンタルイースト社）で飼育、10週齢まで欠乏食を継続。対照群は通常餌で飼育したVitamin A-sufficient (VAS)マウスを使用。
②DSS腸炎誘発：VAS・VADマウスに4% DSS（M.W. 5000, WAKO）自由飲水で腸炎を誘発。0・1・2日後にコラゲナーゼ法でLPMCを分離、LPS添加して培養、パイロトーシスを評価。
③Salmonella typhimurium経口感染：S.typhimurium Χ3306株を1X108 CFU/0.2 mlに調整し、経口感染させる。感染0・1・2日後に脾臓を採取、パイロトーシス関連分子を解析。
④CD11b+脾細胞分離・培養：VAS・VADマウスから脾臓を摘出、コラゲナーゼ処理・破砕・溶血をへて脾細胞を分離する。CD11b+脾細胞をマグネットビーズで標識し、AUTOMACS（Miltenyi Biotec社）で分離する。10% FBS RPMIで5X106 /mlに細胞浮遊液を調整し、対照群・LPS添加群（10 μg/ml）に分けて培養→パイロトーシスを解析（上清中IL-1b測定, LDH-releasing assay）。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

自己炎症性疾患患者の血清・内視鏡サンプリングが当初の予定よりは進展が遅れているが、その他計画通りである。

Strategy for Future Research Activity

本研究開始時の仮説である、“マクロファージにおけるレチノイン酸受容体シグナルは、オートファジーを介したCaspase-11活性化の調節により、パイロトーシスとIL-1b産生を制御している”は証明されつつある。追加実験で確定、論文化を進める予定である。

Causes of Carryover

次年度の研究を充実させた方が研究遂行上、有益であると判断し、今年度の計画を見直した結果、当初予定額との差額が生じた。令和５年度は物品費を充実させて研究を進める予定である。