2021 Fiscal Year Research-status Report
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21K08486
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| Research Institution | Clinical Research Center for Allergy and Rheumatology, National Hospital Organization, Sagamihara National Hospital |
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Principal Investigator |
森 晶夫 独立行政法人国立病院機構(相模原病院臨床研究センター), 先端技術開発研究部, 部長 (80251247)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
神山 智 独立行政法人国立病院機構(相模原病院臨床研究センター), 先端技術開発研究部, 研究員 (20626783) [Withdrawn]
神沼 修 広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 教授 (80342921)
大友 隆之 東京薬科大学, 薬学部, 講師 (90463108)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 気管支喘息 / T細胞 / 遅発型喘息反応 / メディエータ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ダニ粗抗原に応答してT細胞IL-5産生が誘導され、吸入負荷で遅発型喘息反応が認められる症例の末梢血単核球を、当該抗原で刺激し、限界希釈法により、T細胞クローンを樹立した。卵白アルブミン（OVA）特異的T細胞受容体トランスジェニックマウスより、T細胞クローンを複数樹立した。これらのT細胞クローンを固相化抗CD3抗体で活性化し、上清中のサイトカイン産生を特異的ELISAで測定した。培養ヒトあるいはマウス気管支平滑筋細胞を、24 well plate内でコラーゲンゲルに封入し、6日間培養後に収縮活性のアッセイに用いた（Kitamura N, et al. Int. Arch. Allergy Immunol. 146:36, 2008, Kitamura N, et al. Int. Arch. Allergy Immunol. 149:83, 2009, Kouyama S, et al. Int. Arch. Allergy Immunol. 161 (Suppl 1):93, 2013）。マウスでは各々のT細胞クローンを無処置マウスに移入し、抗原チャレンジ後、無拘束呼吸機能解析装置（BUXCO）を用いてPenh（enhanced pause）値を、また麻酔下、レスピレータ装着下に呼吸機能測定装置（BUXCO社）を用いて、呼吸抵抗（RL）値を測定した。実験喘息モデルでの抗原特異的遅発型喘息反応（in vivo）と、in vitroでのT細胞クローン培養上清中の気管支平滑筋収縮活性の関連について解析した。活性化に伴い気管支平滑筋収縮活性を産生するT細胞クローンを複数樹立できたので、上清を大量に作成し、濃縮、保存した。収縮活性の精製を目指し、ゲル濾過、イオン交換により分画し、平滑筋収縮活性を評価した。平滑筋収縮活性の高いクローンと平滑筋収縮活性のないクローンとの間で、遺伝子発現解析を比較した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
2021年度に予定していた3項目のうち、①IgE非依存性、T細胞依存性の遅発型喘息反応のcharacterization、新規気管支平滑筋収縮物質の同定 ― 非アトピー型喘息症例末梢血Tリンパ球、T細胞クローンの培養、培養ヒト気管支平滑筋細胞のゲル内収縮実験、②生化学的精製、ジーンチップ解析、③T細胞依存性マウス気管支閉塞モデルの解析、が概ね順調に進行し、次年度の進展につながる成果が得られた。
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| Strategy for Future Research Activity |
2021年度に開始した研究項目のうち、②、③を継続する。加えて、当初予定していた研究項目の、④平滑筋収縮候補分子の発現、アッセイ（中和含む）、モノクローナル抗体作成、に取り組む。②、③の結果絞り込まれた候補分子について、リコンビナント体を作成し、臨床検査診断薬開発に向けたモノクローナル抗体作成を開始したい。
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| Causes of Carryover |
研究計画当初予定していた研究項目の②生化学的精製、ジーンチップ、プロテオーム解析において、プロテオーム解析の実験条件についての詳細な検討を進めている段階で、実際に本実験を実施する際に必要となる試薬については、次年度に購入するため、約26万円使用しなかった。
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[Journal Article] Suppressive effect of dexamethasone on murine Th9 cell-mediated nasal eosinophilic inflammation2021
Author(s)
Koyama, T., Miura, K., Yamasaki, N., Ogata, S., Saeki, M., Hiroi, T., Mori, A., and Kaminuma, O.
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Journal Title
Asia Pac Allergy
Volume: 11
Pages: e25
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] L-type amino acid transporter 1 inhibitor suppresses murine Th2 cell-mediated bronchial hyperresponsiveness independently of eosinophil accumulation2021
Author(s)
Ito, D., Miura, K., Saeki, M., Yamasaki, N., Ogata, S., Mori, A., Endou, H., Hayashi, K., and Kaminuma, O.
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Journal Title
Asia Pac Allergy
Volume: 11
Pages: e33
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Presentation] Pharmacological characterization of T cell-induced bronchoconstriction in vivo and in vitro2021
Author(s)
Mori, A., Kouyama, S., Yamaguchi, Y., Kumitani, C., Ohtomo-Abe, A., Kawasaki, Y., Iwamoto, K., Yano, K., Iwata, M., Nagayama, K., Ryu, K., Nakamura, Y., Hamada, Y., Watai, K., Kamide, Y., Sekiya, K., Fukutomi, Y., Ohtomo, T., and Kaminuma, O.
Organizer
European Academy of Allergy and Clinical Immunology Hybrid Congress 2021 (Madrid-Krakow, on line)
Int'l Joint Research
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[Presentation] Sublingual immunotherapy suppresses mast cell degranulation through the upregulation of thrombospondin-12021
Author(s)
Kaminuma, O., Kitamura, N., Gotoh, M., Okubo, K., Mori, A., and Hiroi, T.
Organizer
European Academy of Allergy and Clinical Immunology Hybrid Congress 2021 (Madrid-Krakow, on line)
Int'l Joint Research
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[Presentation] Molecular characterization of bronchoconstriction induced by activated T cells2021
Author(s)
Kouyama, S., Yamaguchi, M., Kumitani, C., Ohtomo-Abe, A., Kawasaki, Y., Iwamoto, K., Yano, K., Iwata, M., Nagayama, K., Ryu, K., Nakamura, Y., Hamada, Y., Watai, K., Kamide, Y., Sekiya, K., Fukutomi, Ohtomo, T., Kaminuma, O, and Mori, A.
Organizer
European Respiratory Society 2021 International Congress (London, on line)
Int'l Joint Research
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[Presentation] Possible mechanisms of T cell-induced bronchoconstriction2021
Author(s)
Mori, A., Kouyama, S., Ohtomo-Abe, A., Ryu, K., Nakamura, Y., Hamada, Y., Watai, K., Kamide, Y., Sekiya, K., Ohtomo, T., Kaminuma, O.
Organizer
Asia Pacific Association of Allergy, Asthma and Clinical Immunology International Conference 2021 (Taipei, on line)
Int'l Joint Research
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