2022 Fiscal Year Research-status Report
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21K08486
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| Research Institution | Clinical Research Center for Allergy and Rheumatology, National Hospital Organization, Sagamihara National Hospital |
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Principal Investigator |
森 晶夫 独立行政法人国立病院機構(相模原病院臨床研究センター), 先端技術開発研究部, 部長 (80251247)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
神山 智 独立行政法人国立病院機構(相模原病院臨床研究センター), 先端技術開発研究部, 研究員 (20626783) [Withdrawn]
神沼 修 広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 教授 (80342921)
大友 隆之 東京薬科大学, 薬学部, 講師 (90463108)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 気管支喘息 / T細胞 / 遅発型喘息反応 / メディエータ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
2021年度には、ダニ粗抗原に応答してT細胞IL-5産生が誘導され、吸入負荷で遅発型喘息反応が認められる症例の末梢血単核球を、当該抗原で刺激し、限界希釈法により、T細胞クローンを樹立した。動物モデル樹立の目的には、卵白アルブミン（OVA）特異的T細胞受容体トランスジェニックマウスより、T細胞クローンを複数樹立し、これらのT細胞クローンを固相化抗CD3抗体で活性化し、上清中のサイトカイン産生を特異的ELISAで測定した。培養ヒトあるいはマウス気管支平滑筋細胞を、24 well plate内でコラーゲンゲルに封入し、6日間培養後に収縮活性のアッセイに用いた。マウスでは各々のT細胞クローンを無処置マウスに移入し、抗原チャレンジ後、無拘束呼吸機能解析装置（BUXCO）を用いてPenh（enhanced pause）値を、また麻酔下、レスピレータ装着下に呼吸機能測定装置（BUXCO社）を用いて、呼吸抵抗（RL）値を測定した。実験喘息モデルでの抗原特異的遅発型喘息反応（in vivo）と、in vitroでのT細胞クローン培養上清中の気管支平滑筋収縮活性の関連について解析した。活性化に伴い気管支平滑筋収縮活性を産生するT細胞クローンを複数樹立できたので、上清を大量に作成し、濃縮、保存した。収縮活性の精製を目指し、ゲル濾過、イオン交換により分画し、平滑筋収縮活性を評価した。2022年度には、平滑筋収縮活性の高いクローンと平滑筋収縮活性のないクローンとの間で、遺伝子発現解析、生化学的精製、プロテオーム解析を実施し、候補分子の絞り込みを試みた。さらに、候補分子については、リコンビナント体の作成、中和抗体実験を開始した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
2022年度までに予定していた4項目のうち、①IgE非依存性、T細胞依存性の遅発型喘息反応のcharacterization、新規気管支平滑筋収縮物質の同定 ― 非アトピー型喘息症例末梢血Tリンパ球、T細胞クローンの培養、培養ヒト気管支平滑筋細胞のゲル内収縮実験、②生化学的精製、ジーンチップ解析、③T細胞依存性マウス気管支閉塞モデルの解析、④ 平滑筋収縮候補分子の発現、アッセイ（中和含む）、モノクローナル抗体作成、が概ね順調に進行し、最終年度への進展につながる成果が比較的順調に得られた。
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| Strategy for Future Research Activity |
2021年度に開始、2022年度に継続した研究項目のうち、②、③、④ を継続する。加えて、最終年度においては、④ 平滑筋収縮候補分子の発現、アッセイ（中和含む）、モノクローナル抗体作成に重点を置いて、研究項目②、③の結果絞り込まれた候補分子について、リコンビナント体を作成し、臨床検査診断薬開発に向けたモノクローナル抗体作成を展開したい。
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| Causes of Carryover |
研究計画当初予定していた研究項目の②生化学的精製、ジーンチップ、プロテオーム解析において、プロテオーム解析の実験条件についての詳細な検討を進めている段階で、実際に本実験を実施する際に必要となる試薬については、次年度に購入するため、約38万円使用しなかった。
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[Journal Article] Re-evaluation of over-the-counter histamine H1-receptor antagonists based on their effects on murine models of allergen-induced nasal hyperresponsiveness2022
Author(s)
Uda, N., Ogata, S., Yamasaki, N., Miura, S., Hosomi, N., Mori, A., Goto, M., Miura, K., and Kaminuma, O.
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Journal Title
J. Pharm. Sciences.
Volume: 150
Pages: 275-278
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Th17-dependent nasal hyperresponsiveness is mitigated by steroid treatment2022
Author(s)
Ueda, S., Miura, K., Kawasaki, H., Ogata, S., Yamasaki, N., Miura, S., Mori, A., and Kaminuma, O.
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Journal Title
Biomolecules
Volume: 12
Pages: 674
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] T cell-dependent steroid-resistant asthma is mediated by tyrosine kinases of costimulatory signal2022
Author(s)
Mori, A., Kouyama, S., Ohtomo-Abe, A., Iwamoto, K., Yano, K., Fujita, N., Iwata, M., Nagayama, K., Nakamura, Y., Hamada, Y., Watai, K., Kamide, Y., Sekiya, K., Fukutomi, Y., Ohtomo, T., Kaminuma, O.
Organizer
European Academy of Allergy and Clinical Immunology Hybrid Congress 2022
Int'l Joint Research
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[Presentation] Control of T cell-dependent steroid-resistant asthma model by several kinase inhibitors2022
Author(s)
Mori, A., Kouyama, S., Yamaguchi, M., Ohtomo-Abe, A., Iwamoto, K., Yano, K., Fujita, N., Iwata, M., Nagayama K., Ryu, K., Nakamura, Y., Hamada, Y., Watai, K., Kamide, Y., Sekiya, K., Fukutomi, Y., Ohtomo, T., Kaminuma, O.
Organizer
European Respiratory Society International Congress 2022
Int'l Joint Research
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