2023 Fiscal Year Annual Research Report
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21K08486
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| Research Institution | Clinical Research Center for Allergy and Rheumatology, National Hospital Organization, Sagamihara National Hospital |
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Principal Investigator |
森 晶夫 独立行政法人国立病院機構(相模原病院臨床研究センター), 先端技術開発研究部, 部長 (80251247)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
神山 智 独立行政法人国立病院機構(相模原病院臨床研究センター), 先端技術開発研究部, 研究員 (20626783) [Withdrawn]
神沼 修 広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 教授 (80342921)
大友 隆之 東京薬科大学, 薬学部, 講師 (90463108)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 気管支喘息 / T細胞 / 遅発型喘息反応 / メディエータ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
2021年度には、ダニ粗抗原に応答してT細胞IL-5産生が誘導され、吸入負荷で遅発型喘息反応が認められる症例の末梢血単核球から、抗原刺激、限界希釈法にて、複数のT細胞クローンを樹立した。培養ヒトあるいはマウス気管支平滑筋細胞を、コラーゲンゲルに封入し、6日間培養後に収縮活性のアッセイに用いた。実験喘息モデルには、卵白アルブミン（OVA）特異的T細胞受容体トランスジェニックマウスより、T細胞クローンを複数樹立し、固相化抗CD3抗体で活性化し、上清中のサイトカイン産生を特異的ELISAで測定した。各々のT細胞クローンを無処置マウスに移入し、抗原チャレンジ後、無拘束呼吸機能解析装置（BUXCO）を用いてPenh（enhanced pause）値を、また麻酔下、レスピレータ装着下に呼吸機能測定装置（BUXCO社）を用いて、呼吸抵抗（RL）値を測定した。in vivoの抗原特異的遅発型喘息反応と、in vitroでのT細胞クローン培養上清中の気管支平滑筋収縮活性の関連について解析した。活性化に伴い気管支平滑筋収縮活性を産生するT細胞クローンを複数樹立できたので、2022年度には、上清を大量に作成し、濃縮、保存した。収縮活性の精製を目指し、ゲル濾過、イオン交換により分画し、平滑筋収縮活性を評価した。平滑筋収縮活性の高いクローンと平滑筋収縮活性のないクローンとの間で、遺伝子発現解析、生化学的精製、プロテオーム解析を実施し、候補分子の探索を開始した。 2023年度には、十数個のタンパク質を候補分子として絞り込み、リコンビナント体の作成、中和抗体による活性の阻害実験を実施した。有意な収縮活性を有する分子を見出せたものの、中和抗体でクローン上清の収縮活性を中和できなかったことから、収縮活性を担う責任分子との同定には至らなかった。残る候補分子について、収縮活性および中和抗体の評価を進めている。
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[Presentation] Biochemical analysis of T cell dependent bronchoconstriction2023
Author(s)
Kouyama, S., Ohtomo-Abe, A., Tawasaki, Y., Iwata, M., Nakamura, Y., Hamada, Y., Kamide, Y., Sekiya, K., Fukutomi, Y., Ohtomo, T., Kaminuma, O., and Mori, A.
Organizer
American Academy of Allergy Asthma & Immunology Annual Meeting 2023
Int'l Joint Research
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[Presentation] Biological and biochemical analysis of T cell derived bronchoconstriction2023
Author(s)
Kouyama, S., Ohtomo-Abe, A., Kawasaki, Y., Iwata, M., Nakamura, Y., Hamada, Y., Kamide, Y., Sekiya, K., Fukutomi, Y., Ohtomo, T., Kaminuma, O. and Mori, A.
Organizer
European Respiratory Society 2023 International Congress
Int'l Joint Research
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[Presentation] Cellular and molecular analysis of T cell-dependent steroid-resistant asthma model2023
Author(s)
Kouyama, S., Ohtomo-Abe, A., Kawasaki, Y., Nakamura, Y., Hamada, Y., Kamide, Y., Sekiya, K., Fukutomi, Y., Ohtomo, T., Kaminuma, O. and Mori, A.
Organizer
Asia Pacific Society of Respirology 2023 International Congress
Int'l Joint Research
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[Presentation] Cellular Analysis of T cell-dependent steroid-resistant asthma2023
Author(s)
Kouyama, S., Ohtomo-Abe, A., Kawasaki, Y., Nakamura, Y., Kamide, Y., Sekiya, K., Ohtomo, T., Kaminuma, O. and Mori, A.
Organizer
Asia Pacific Association of Allergy, Asthma and Clinical Immunology International Conference 2023
Int'l Joint Research
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[Presentation] Pharmacological characterization of T cell-induced bronchoconstriction2023
Author(s)
Kouyama, S., Ohtomo-Abe, A., Kawasai, Y., Iwata, M., Nakamura, Y., Kamide, Y., Sekiya, K., Fukutomi, Y., Ohtomo, T., Kaminuma, O. and Mori, A.
Organizer
World Allergy Congress 2023
Int'l Joint Research
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[Presentation] Biochemical characterization of T cell derived bronvhoconstriction2023
Author(s)
Kouyama, S., Ohtomo-Abe, A., Kawasai, Y., Iwata, M., Nakamura, Y., Hamada, Y., Kamide, Y., Sekiya, K., Fukutomi, Y., Ohtomo, T., Kaminuma, O. and Mori, A.
Organizer
European Academy of Allergy and Clinical Immunology 2023
Int'l Joint Research
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