2022 Fiscal Year Research-status Report
CRF受容体1および2遺伝子改変マウスによるCRFニューロン回路の同定と機能解析
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21K08563
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| Research Institution | Tohoku Fukushi University |
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Principal Investigator |
井樋 慶一 東北福祉大学, 健康科学部, 教授 (60232427)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松井 広 東北大学, 生命科学研究科, 教授 (20435530)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | マウス / ストレス / 脳 / 神経路 / ウイルスベクター |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々は最近，CRF受容体1 （CRFR1） 遺伝子，または，CRF受容体2（CRFR2）遺伝子にCreリコンビナーゼをノックインしたマウス（CRFR1-CreおよびCRFR2-Cre）を作製した．これらのドライバーマウスとGFPレポーターマウスを交配して作製したCRFR1発現ニューロン選択的GFP発現マウス，および，CRFR2発現ニューロン選択的GFP発現マウスを用いて，マウス脳内におけるCRFR1およびCRFR2発現ニューロンの分布を検討した．この実験は前年度に既に行ったものであるが，一部実験結果に不確かな部分があったので再実験を行なった．CRFR1およびCRFR2発現ニューロンの脳内分布はこれまでにin situ hybridization法を用いて検討された結果にほぼ一致した．次に，CRFR1発現ニューロンおよびCRFR2発現ニューロンの投射先を明らかにするために，Cre依存的GFP発現ウイルスベクターを局所注入し，これらのニューロンを順行性に追跡した．まず初めに視床下部室傍核（PVH）に存在するCRFニューロンの部位にウイルスベクターを注入したところ，これらのニューロンは，孤束核，青斑核，視床室傍核，外側視床下部など広範な脳内に投射することが明らかにされた．孤束核にはCRFR2発現ニューロンが認められたので，現在これらのニューロンの投射神経路を追跡中である．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
今年度は，前年度に既に行った実験結果の一部に不確かな部分があったため，再実験を行なった．すなわち，CRFR1-CreおよびCRFR2-CreドライバーマウスとGFPレポーターマウスを交配して作製したCRFR1発現ニューロン選択的GFP発現マウス，および，CRFR2発現ニューロン選択的GFP発現マウスを用いて，マウス脳内におけるCRFR1およびCRFR2発現ニューロンの分布を再度検討しなおした．その結果，CRFR1およびCRFR2発現ニューロンの脳内分布はこれまでにin situ hybridization法を用いて検討された結果にほぼ一致した．
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度は，まず，現在進行中の延髄孤束核（NTS）におけるCRFR2発現ニューロンの順行性追跡実験を火完成させ，NTSからCRFR2発現ニューロンがいずれの脳内領域に投射するかを明らかにする．次に，Cre依存的チャネルロドプシン2（ChR2），または，Cre依存的抑制型チャネルロドプシン2（ACR2）発現ウイルスベクターをNTSに注入し，これらのマウスに光ファイバーを植え込み，青色光照射によりNTSにおけるCRFR2発現ニューロンを選択的に刺激，または，抑制する．光照射マウスの摂食量を対照マウスと比較し，NTSにおけるCRFR2発現ニューロンが摂食調節に及ぼす役割を検討する．これと並行して，青斑核（LC）におけるCRFR1発現ニューロンの投射先を追跡し，さらに，NTSと同様の手法をもちいて，光遺伝学的実験により，LCにおけるCRFR1発現ニューロンの不安様行動における役割を検討する．これらの成果をまとめ，国際誌に投稿する．
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| Causes of Carryover |
マウス床敷料金が改訂されたため，予定支出と実質支出に齟齬が生じたため．
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