2022 Fiscal Year Research-status Report
遺伝子改変マウスを用いたMIRAGE症候群における副腎機能低下症の病態解明
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21K08564
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
長谷川 奉延 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 教授 (20189533)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
石井 智弘 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 准教授 (70265867)
鳴海 覚志 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 分子内分泌研究部, 室長 (40365317)
高田 修治 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, システム発生・再生医学研究部, 部長 (20382856)
天野 直子 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 共同研究員 (70348689)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | MIRAGE症候群 / SAMD9 / 遺伝子改変マウス / 副腎 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
内因性Sf1プロモーター・エンハンサーによりCreリコンビナーゼを発現するマウス（以下Sf1 promoter Creマウス）は、副腎皮質にCreリコンビナーゼを強発現する。我々は、Creリコンビナーゼによりヒト野生型SAMD9遺伝子を発現するマウス（SAMD9-WTマウス）、およびMIRAGE症候群で認めたヒトSAMD9点変異p.R1293Wを発現するマウス（SAMD9-MTマウス）を作成した。本研究では、SAMD9-WTマウスあるいはSAMD9-MTマウスとSf1 promoter Creマウスを掛け合わせ、胎児期から野生型SAMD9あるいは変異型SAMD9を副腎に強発現する遺伝子改変マウス（それぞれSAMD9-WT副腎発現マウス、およびSAMD9-MT副腎発現マウス）を作成している。SAMD9-WT副腎発現マウス51匹中48匹が24週齢まで生存し、さらに飼育継続中である。一方SAMD9-MT副腎発現マウス16匹のうち12匹は日齢0-1に、３匹は日齢7までに死亡し、１例は４週齢まで生存した。
日齢1に安楽死させた雌SAMD9-WT副腎発現マウスの副腎は明らかな組織学的異常を認めなかった。また日齢1に死亡した雌SAMD9-MT副腎発現マウスの副腎は死後変化と思われる組織学的異常を認めた。４週齢まで生存した雌SAMD9-MT副腎発現マウスの副腎は明らかな組織学的異常を認めなかった。このマウスの副腎および他の臓器に、SAMD9機能保持に有利なreversion変異が入っていないかを解析中である。。
現在、分娩直前の母体を帝王切開し、SAMD9-WT副腎発現マウスおよびSAMD9-MT副腎発現マウスを確実に回収し、胎子ごとホルマリン固定している。すでに、SAMD9-WT副腎発現マウス４匹およびSAMD9-MT副腎発現マウス１匹を得た。副腎の組織学的検討を進めている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
SAMD9-MT副腎発現マウスの多くが日齢0-1に死亡したため、死後変化を伴わないSAMD9-MT副腎発現マウスを十分な数確保することが困難であった。結果的に、進捗状況としてはやや遅れている。そこで当初の予定を変更し、分娩直前の母体を帝王切開してSAMD9-WT副腎発現マウスおよびSAMD9-MT副腎発現マウスをともに確実に生存下で回収することとした。この方法により、現在までに、SAMD9-WT副腎発現マウス胎子4例およびSAMD9-MT副腎発現マウス胎子１例を得て、固定標本から副腎、および対照としての肝臓を含む諸臓器を摘出し保存した。なお毎回母体を帝王切開しているため、結果的にその都度母体マウスを失うこととなった。
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| Strategy for Future Research Activity |
医学系博士課程大学院生1名が本研究を分担している。マウスの飼育、安楽死、体長・体重の測定、解剖による諸臓器の摘出、外眼角採血および心臓採血、妊娠マウスの帝王切開による胎子の娩出などを指導した。現在、多くの生存中のSAMD9-WT副腎発現マウスおよびSAMD9-MT副腎発現マウスを得るべく、マウスの交配を進めている。妊娠マウスの分娩直前の帝王切開を行い、副腎を含む諸臓器の組織学的検討を進めている。さらに、帝王切開で得る生存マウスから心臓採血により血清を得て、ACTH, コルチコステロンなどの測定も予定している。
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