2022 Fiscal Year Research-status Report
胆管発生と胆汁うっ滞性障害肝の病態進展におけるSOX9関連シグナル経路の機能解析
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21K08622
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
吉井 大貴 熊本大学, 病院, 診療助手 (00792582)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
菰原 義弘 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 教授 (40449921)
横内 裕二 熊本大学, 発生医学研究所, 特定事業研究員 (60252227)
本田 正樹 熊本大学, 病院, 助教 (80573609)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | SOX9 / 胆管発生 / 肝内胆管 / 透明化 / ノックアウトマウス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本課題では、胆管発生のメカニズムや胆汁うっ滞性肝疾患の病態進展のメカニズムとSOX9を取り巻くシグナル経路との関連について解析し、胆管発生の複雑なメカニズムの解明への貢献及び胆汁うっ滞性肝疾患をターゲットとした新たな治療戦略の構築へとつなげることを目的としている。2022年度は、コントロールマウスとSox9コンディショナルノックアウト(cKO)マウスの肝臓を用いた胆管の発生における形態学的な解析と免疫組織化学的な解析を行った。
コントロールマウスとSox9cKOマウスとの比較では、昨年度までの解析で、5週齢および10週齢時点で、確認される胆管の密度に差があり、Sox9cKOマウスの胆管数が少なかった。今年度の解析ではすでに1週齢時点で、Sox9cKOマウスにおいてCk19陽性胆管細胞数やosteopontin陽性胆管細胞数はコントロールマウスと比べて少なく、成熟遅延が認められた。さらに、Sox9cKOマウスにおいて、肝辺縁における肝内胆管のhomogenous networkの形成が遅延していた。共焦点顕微鏡を用いたコントロールマウスとSox9cKOマウスとの比較においても、門脈周囲の胆管の密度に差が明らかとなった。
Sox9cKOマウスの門脈周囲ではIba1陽性マクロファージの集簇が認められ、さらにpicrosirius red染色では、門脈周囲の線維化が明らかとなった。胆管の発生異常に伴う肝傷害に由来する変化であると考えられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
SOX9の上流シグナル経路の有無がどの様に胆管発生/形態形成に関わっているか、関連する種々のマーカーの動態を胎生期～成体マウスにかけて経時的に免疫組織学的・遺伝学的に解析するため、TGF-βシグナリング(ALK5=TGF-β receptor I)の抑制(dominant negative form)もしくは活性化(constitutive active form)とそれが起きている細胞の追跡を同時に行うことができるマウス(抑制と活性化の2系統)を用いた機能解析実験を行う予定であったが、他大学から輸送したマウスにおいて当施設で使うための検疫に問題が生じたため、当該マウスを使うことができなくなった。
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| Strategy for Future Research Activity |
使用予定だったマウスについては保管サンプルによる解析を行う方針にする。
明らかな胆管発生異常がみられる場合は、RNAシーケンスによる比較トランスクリプトーム解析により、遺伝子発現量の違いを詳細に解析する。
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| Causes of Carryover |
TGF-βシグナリング経路の構成因子の抑制(dominant negative form)もしくは活性化(constitutive active form)と、それが起きている細胞の追跡を同時に行うことができるマウス(抑制と活性化の2系統)を用いて解析予定であったが、検疫上の問題で使用できなかった。来年度は保管サンプルを用いた解析を行う。さらに、胆管発生・形態形成に関わる研究は継続して行う必要があり、それに関わる研究費として次年度に使用する予定である。また、本年度の研究により明らかになった結果は次年度の学会で発表したり、研究のさらなる進展のため情報収集に使用する予定である。また論文投稿の校正費および投稿費として使用する予定である。
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