2021 Fiscal Year Research-status Report
シングル細胞・遺伝子発現解析による臓器移植後免疫寛容機序の解明
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21K08634
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| Research Institution | National Center for Child Health and Development |
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Principal Investigator |
梨井 康 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 移植免疫研究室, 室長 (60321890)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
上田 祐司 獨協医科大学, 医学部, 准教授 (10364556)
中川 美和 (森田美和) 福岡歯科大学, 口腔歯学部, 客員教授 (90329699)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | 免疫寛容 / 肝臓移植 / CyTOF |
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| Outline of Annual Research Achievements |
初年度は、マウス肝臓移植モデルを用いた解析を行った。その結果、肝臓移植モデルにおいては、移植後拒絶反応の退縮・収束を経過して、自然的に寛容状態が誘導され、免疫抑制剤使用しないで拒絶反応、免疫寛容を解析する可能で、有用なモデルと実験系であることを示した。
また、シングル細胞レベルでの細胞表面抗原の網羅的な解析については、効率的な標的細胞の絞り込みとシングル細胞の分取を行うために、CyTOFを用いて解析を行った。その結果、マウス肝移植後14日目（POD14）および30日目（POD30）における脾臓細胞（SPC）およびグラフト浸潤リンパ球（GIL）に対してシングル細胞レベルでの細胞表面抗原の網羅的な発現プロファイルを得た。viSNE画像による解析では、移植拒絶反応における免疫細胞集団の主要な機能として考えられていたCD3 陽性集団における分布の違いを明らかにした。次に、CD3陽性集団中のメモリーT細胞をFCMにより解析を行った。その結果、組織特異的なメモリーT細胞であるCD3+CD8+CD69+細胞集団が、POD30のGILにおいて増加することを見出した。さらに、CD4 陽性細胞集団のCCR7発現しているセントラルメモリーのT細胞サブセットは、POD14とPOD30の間で異なることを明らかにした。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
初年度では、マウス肝臓移植モデルを用いた解析を行った結果、マウス肝臓モデルは免疫抑制剤使用しないで拒絶反応、免疫寛容を解析する可能で、有用なモデルと実験系であることを示した。また、CyTOFを用いて解析では、移植後マウスの移植肝臓と脾臓に対してシングル細胞レベルでの細胞表面抗原の網羅的な発現プロファイルを得たため、概ね研究計画通りで、研究を順調に進展していると考える。
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| Strategy for Future Research Activity |
研究計画の通りで、リンパ球活性化の指標として、ドナー、レシピエントマーカーに細胞特異的染色を組み合わせた蛍光多重染色により、臓器内感作や免疫抑制の場面をin situで解析する予定。拒絶反応・免疫寛容に深く関与していると考えられている制御性T、B、DCの解析を重点的に行う。
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| Causes of Carryover |
分担研究者の施設で、研究用消耗品の発注は間に合わなかったため、助成金が残った。翌年度の予算として、使用計画に組み込む予定である。
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