Development of a novel lymphatic regeneration therapy by direct reprogramming

2023 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 21K08833
• Research Institution: Asahikawa Medical College
• Principal Investigator: 齊藤 幸裕 旭川医科大学, 医学部, 客員准教授 (80540583)
• Project Period (FY): 2021-04-01 – 2024-03-31
• Keywords: リンパ管 / 静脈 / ダイレクト・リプログラミング

Outline of Annual Research Achievements

次世代再生医療であるダイレクト・リプログラミング(D-reP)技術を利用した、発生学的に同系列である静脈をリンパ管へと誘導するリンパ浮腫新規治療法の開発研究である。先行研究の結果からD-reP因子としてProx1とVEGFR-3が候補となることを見出した。D-rePが上手く誘導できたかを確認するためのマーカーが必要なためリンパ管内皮細胞(LEC)、伏在静脈内皮細胞(HSaVEC)、HUVECの3細胞培養系を用いて血管、リンパ管のマーカーとなる遺伝子発現（Prox1、HGF、Met、LYVE-1、Ets-1、Ets-2、VEGF-A、Sox18、 VEGFR-3、TGF-b1、FoxC2、ANGPT2、VEGF-C）について検索した。これらで常にLECでHSaVECとHUVECの両方より高発現していたのはProx1、VEGFR-3、ANGPT2、LYVE-1の4遺伝子であった。Prox-1とVEGFR-3はD-reP因子として利用するため、ANGPT2とLYVE-1をマーカーとした。HSaVECにProx-1、VEGFR-3、Prox-1+VEGFR-3プラスミドを遺伝子導入しreal time PCRで確認した。 GFP導入群に比較してD-reP因子候補遺伝子が5日目まで十分に発現していた。さらにANGPT2とLYVE-1の遺伝子発現を確認したがProx-1、VEGFR-3の発現上昇を認めたが、ANGPT2とLYVE-1の発現に変化はなくHSaVECをLECへと誘導することはできなかった。以上からProx-1、VEGFR-3の2つの遺伝子導入のみでD-rePすることは困難と考え追加因子を探索した。網羅的解析の結果、HSaVECと比べLECで10倍あるいは0.1倍は合計130配列であった。今後はこれらの候補因子を絞り込みD-reP因子を特定する。