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2022 Fiscal Year Research-status Report

難治性インプラント感染における抗バイオフィルム戦略

Research Project

Project/Area Number 21K09301
Research InstitutionNagasaki University

Principal Investigator

今井 智恵子 (野口智恵子)  長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 客員研究員 (90746653)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 尾崎 誠  長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 教授 (20380959)
小関 弘展  長崎大学, 医歯薬学総合研究科(保健学科), 教授 (70457571)
Project Period (FY) 2021-04-01 – 2024-03-31
Keywords感染症 / バイオフィルム / 人工材料
Outline of Annual Research Achievements

令和4年度の研究内容は、抗菌剤とバイオフィルム形成の関係性の解明であった。対象となる細菌を黄色ブドウ球菌、緑膿菌、及びそれらの薬剤耐性株とした。骨関節感染症ガイドラインで推奨されている抗菌薬(CEZ、 VCM、 LZD、 DAP)を用いて、抗菌剤の濃度と浮遊菌量、およびバイオフィルムの形成量との相関を検証した。抗菌剤の濃度が低い(MIC以下の)場合、浮遊細菌数は減少するものの、バイオフィルム形成量が増加した。抗菌剤の濃度が適切(MIC濃度以上)の場合は浮遊菌、バイオフィルム形成量ともに減少した。この現象を引き起こすシグナルがDNA変異によるものか、RNAレベルなのか、タンパクレベルなのかを、Isoplant (日本ジーン)によるDNA抽出とMiseq(イルミナ)によるゲノム解析を行い、NCBIのデータベースと照らし合わせながら原因遺伝子を特定している段階である。糖鎖解析はマトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析法で行っている。その他、バイオフィルムの生菌と死菌、細胞外マトリックスの構造をLive/Dead Staining Kitと共焦点レーザー顕微鏡で観察する行程が始まった。データが揃い次第、VCC (viable cell count)、ATP-bioluminescence (ATP)も算出する。各材料間、及び時間軸におけるVCC、ATP値を統計学的に比較する(一元配置分散分析:ANOVA、多重比較定)。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

抗菌剤とバイオフィルム形成の関係性の解明に関して、黄色ブドウ球菌、緑膿菌、及びそれらの薬剤耐性株を入手し、継代培養している。骨関節感染症ガイドラインで推奨されている抗菌薬(CEZ、 VCM、 LZD、 DAP)を購入して、抗菌剤の濃度と浮遊菌量、およびバイオフィルムの形成量との相関を検証した。また、Isoplant (日本ジーン)によるDNA抽出とMiseq(イルミナ)によるゲノム解析を行い、NCBIのデータベースと照らし合わせながら原因遺伝子を特定している。糖鎖解析はマトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析法で行っている。バイオフィルムの生菌と死菌、細胞外マトリックスの構造をLive/Dead Staining Kitと共焦点レーザー顕微鏡で観察している。為替、新型コロナウイルス感染拡大、ウクライナ戦争など社会的情勢により、海外からの物品、試薬の入手に時間がかかったため、令和4年度に完了する予定であった手技が現在進行中である。

Strategy for Future Research Activity

必要な物品は概ね入手できたため、現在進行中の研究を進めていく。令和5年末までにはゲノム解析と糖鎖解析を完了させ、共焦点レーザー顕微鏡写真の撮影を終える予定である。また、同時に令和5年度で予定していた動物実験(ラット大腿骨インプラント感染モデルの作製し、抗菌薬の効果を判定する。)を開始する。動物実験の許可は得ている。酸化チタンの抗菌性と超音波刺激による対バイオフィルム効果の評価についても随時開始する。

Causes of Carryover

新型コロナウイルス感染症拡大、為替、ウクライナ戦争などの社会背景の影響で、抗菌薬(CEZ、 VCM、 LZD、 DAP)、Isoplant (日本ジーン)、Miseq(イルミナ)、Live/Dead Staining Kitなどの試薬や製品の購入に時間を要したため。今後は、ゲノム解析と糖鎖解析、共焦点レーザー顕微鏡の撮影、動物実験(ラット大腿骨インプラント感染モデルの作製し、抗菌薬の効果を判定する。)に関わる設備費用、施設使用料、各種試薬と検査キット、情報収集と学会発表のための旅費、論文作成のための校正費用、論文掲載費に使用する予定である。

  • Research Products

    (15 results)

All 2023 2022

All Journal Article (6 results) (of which Int'l Joint Research: 2 results,  Peer Reviewed: 6 results,  Open Access: 6 results) Presentation (9 results)

  • [Journal Article] 脛骨顆外反骨切り術におけるX線学的所見と短期臨床成績の関連性2023

    • Author(s)
      小関弘展,米倉暁彦,樋口隆志,砂川伸也,西山裕太,尾﨑 誠
    • Journal Title

      臨床雑誌『整形外科』

      Volume: 74 Pages: 1~6

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] 人工爪装置による掻破動作の客観的評価2023

    • Author(s)
      小関弘展,室田浩之,志田崇之,砂川伸也,松村 海
    • Journal Title

      日本義肢装具学会誌

      Volume: 39 Pages: 47~52

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] 少年野球選手の肘関節痛に関わる危険因子2023

    • Author(s)
      小関弘展,梶山史郎,西山裕太,水上 諭,砂川伸也,今井智恵子,森川明典, 北村英利,山口和博
    • Journal Title

      臨床整形外科

      Volume: 58 Pages: 191-197

    • DOI

      10.11477/mf.1408202562

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Radiological evaluation of joint space width in medial knee osteoarthritis2022

    • Author(s)
      Yuta Nishiyama, Hironobu Koseki, Chieko Imai, Takayuki Shida, Shinya Sunagawa, Masanori Yamaguchi, Umi Matsumura, Hitoshi Iwanaga
    • Journal Title

      Acta Medica Nagasakiensia

      Volume: 65 Pages: 123-129

    • DOI

      10.11343/amn.65.123

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] 高位脛骨骨切り術と脛骨顆外反骨切り術の臨床成績比較2022

    • Author(s)
      樋口隆志,小関弘展,砂川伸也,松村 海,今井智恵子,米倉暁彦,尾﨑 誠
    • Journal Title

      整形・災害外科

      Volume: 65 Pages: 1695-1699

    • DOI

      10.18888/se.0000002391

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Progression of microstructural deterioration in load-bearing immobilization osteopenia2022

    • Author(s)
      Hironobu Koseki, Makoto Osaki, Yuichiro Honda, Shinya Sunagawa, Chieko Imai, Takayuki Shida, Umi Matsumura, Junya Sakamoto, Iku Tomonaga, Seiichi Yokoo, Satoshi Mizukami, Minoru Okita
    • Journal Title

      PLoS One

      Volume: 17 Pages: e0275439

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0275439.

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Presentation] ニーブレースを装着した歩行における足関節角度の変化2022

    • Author(s)
      西山裕太,砂川伸也,渡部果歩,今井智恵子,小関弘展
    • Organizer
      第59回日本リハビリテーション医学会学術集会
  • [Presentation] 掻破動作における主動作指と掻破部位による特徴2022

    • Author(s)
      砂川伸也,渡部果歩,西山裕太,今井智恵子,小関弘展
    • Organizer
      第59回日本リハビリテーション医学会学術集会
  • [Presentation] 表皮ブドウ球菌の生体材料表面付着に対するコバルトクロム摩耗粉の影響2022

    • Author(s)
      小関弘展,今井智恵子,砂川伸也,志田崇之,朝永 育,尾﨑 誠
    • Organizer
      第45回日本骨・関節感染症学会学術集会
  • [Presentation] コバルトクロム摩耗粉は表皮ブドウ球菌のインプラント表面への付着を抑制する2022

    • Author(s)
      小関弘展,今井智恵子,砂川伸也,志田崇之,朝永 育,尾﨑 誠
    • Organizer
      第37回日本整形外科学会基礎学術集会
  • [Presentation] 高位脛骨骨切り術と脛骨顆外反骨切り術の短期臨床成績比較2022

    • Author(s)
      小関弘展,今井智恵子,尾﨑 誠
    • Organizer
      第6回日本リハビリテーション医学会秋季学術集会
  • [Presentation] 少年野球選手の肘関節痛に関わる危険因子2022

    • Author(s)
      小関弘展,今井智恵子,尾﨑 誠
    • Organizer
      第6回日本リハビリテーション医学会秋季学術集会
  • [Presentation] 膝関節固定装具が歩行周期における足関節角度へ及ぼす影響2022

    • Author(s)
      西山 裕太,砂川 伸也,本田(渡部) 果歩,今井智恵子,小関 弘展
    • Organizer
      第6回日本リハビリテーション医学会秋季学術集会
  • [Presentation] 掻破動作の運動学的および神経生理学的分析2022

    • Author(s)
      砂川 伸也,渡部 果歩,西山 裕太,今井智恵子,小関 弘展
    • Organizer
      第6回日本リハビリテーション医学会秋季学術集会
  • [Presentation] バックスクワットの動作速度の違いが両下肢荷重量に与える影響2022

    • Author(s)
      渡部果歩,砂川伸也,西山裕太,竹内明日香,今井智恵子,小関弘展
    • Organizer
      九州理学療法士学術大会2022in福岡

URL: 

Published: 2023-12-25  

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