2022 Fiscal Year Research-status Report

胸腺移植を用いた細胞性免疫機能改変による老人性難聴予防とヒトへの応用

Research Project

Project/Area Number	21K09593
Research Institution	Kansai Medical University
Principal Investigator	杉田侑己関西医科大学, 医学部, 助教 (50786697)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	岩井大関西医科大学, 医学部, 教授 (10232638) 小林良樹関西医科大学, 医学部, 講師 (10375298) 稲葉宗夫関西医科大学, 医学部, 非常勤講師 (70115947) 神田晃関西医科大学, 医学部, 教授 (70375244)
Project Period (FY)	2021-04-01 – 2024-03-31
Keywords	加齢性難聴 / 老人性難聴モデルマウス / Treg / IL-1 type2 receptor / 胸腺移植 / 細胞性免疫機能改変 / NO / Oxi-Inflamm-Aging
Outline of Annual Research Achievements	報告者らは以前、老化促進モデルマウスであるSAMP1を用いて、胎児胸腺の腎被膜下移植や同系若齢マウスの凍結保存リンパ球接種により難聴の進行が予防されることを明らかにしている。 2022年度は科研費2年目にあたる。2021年度にホストとなるC57BL/6マウスを購入し、6群：C57/BL6マウスにおいて若齢（2か月齢）マウス群、無処置群、コントロール（生食接種、SHAM手術）群、eGFP胎児マウスの胸腺を移植する群、若齢eGFPマウスのリンパ球を接種する群、eGFPマウスにおいて無処置群を作製した。若齢eGFPマウスリンパ球を予め凍結保存しておき、4か月齢から1.5か月ごとに計5回リンパ球接種群に接種を行った。胸腺移植群には4か月齢、8か月齢において腎被膜下に移植を行った。12か月齢（若齢群は2か月齢）においてABR、Tリンパ球機能検査、リンパ球フローサイトメトリー、血清採取、蝸牛採取、胎児胸腺が移植された腎臓採取、脳採取、肝臓採取などを行った。 2022年度には、それぞれにおいて各種アッセイ（Nitric Oxide測定、胸腺移植群での腎被膜下移植片の病理学的生着確認、蝸牛のHE染色や免疫染色による組織学的検討、リアルタイムPCRによる蝸牛や各臓器のアポトーシスや炎症の遺伝子測定）を行った。 C57BL/6マウスにおいても難聴の進行が有意に予防されていた。しかし、血清Nitric Oxideなど有意差を認めないものもあった。血清中の酸化ストレスの上昇はないものの、加齢による難聴の進行があり、処置により進行予防を認めている。何が原因となっているのかいまだ明らかとなっていないことも多い。機序を明らかにするため、より上流である骨髄細胞を用いて検討していく予定である。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 当初の予定であるC57BL/6マウスの実験は終了し、アッセイの結果もそろってきている。有毛細胞など十分なデータを集められていないものもあるが、それと並行して骨髄細胞を用いた次の実験を開始出来ている。
Strategy for Future Research Activity	老化促進モデルマウスであるSAMP1をホストとし、コントロール群（生食接種、SHAM手術）、胸腺移植群、骨髄移植群、胸腺移植＋骨髄移植群、培養した骨髄細胞移植群を作製した。2023年度はこれらの処置を行い、12か月齢で組織採取を行い、解析、検討を行っていく予定である。
Causes of Carryover	予定の実験は終了したため次年度使用額が発生している。次のステップの実験を開始している。マウスは飼育中であり、次年度使用予定分とあわせてマウス飼育費や実験に必要なマウス、試薬などの購入に使用する予定である。