頭頸部癌におけるMHCクラスⅡインバリアント鎖CD74の機能解析と新規治療法開発

2021 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 21K09599
• Research Institution: Asahikawa Medical College
• Principal Investigator: 長門 利純 旭川医科大学, 医学部, 講師 (80431419)
• Project Period (FY): 2021-04-01 – 2024-03-31
• Keywords: CD74 / MHCクラスⅡ / 頭頸部癌 / 免疫療法 / 抗体療法

Outline of Annual Research Achievements

令和3（2021）年度は、咽頭癌や舌口腔癌を含む各種頭頸部癌細胞株の細胞表面におけるCD74の発現をフローサイトメトリーにて解析した。また、ウイルス感染とCD74発現の関連を検討するために、Epstein-Barrウイルス（EBV）またはヒトパピローマウイルス（HPV）陽性の頭頸部癌細胞株も解析に含めた。さらに、頭頸部癌とそれ以外の癌におけるCD74の発現の違いを明らかにする目的で、肺癌、肝癌、大腸癌、腎癌の細胞株におけるCD74発現もあわせて解析した。その結果、いくつかの頭頸部癌細胞株において、細胞表面上にCD74が強く発現していることが明らかとなった。現在、CD74の発現を認めた細胞株の癌種の臨床検体を集め、生検および手術材料組織における腫瘍細胞のCD74発現を免疫組織化学染色にて確認している最中である。さらに、マクロファージ遊走阻止因子（MIF）が細胞表面上のCD74に結合することで腫瘍細胞の増殖・浸潤を促進するとの報告があるため、頭頸部癌細胞株の培養上清、頭頸部癌患者治療前血清、健常人血清を用いてMIF値をELISAにて測定中である。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

頭頸部癌を含めた各種細胞株の収集およびそれらのCD74発現解析がほぼ予定通りに進んだこと、患者組織材料および血清といった臨床検体採取が順調に進んでいること、免疫組織化学染色法とELISA法を用いた臨床検体におけるCD74とMIFの発現解析を現在進めている最中であることなどから、おおむね順調に進展していると考えられる。

Strategy for Future Research Activity

頭頸部癌におけるCD74およびMIFの発現解析を継続して進める。具体的には、CD74の発現を認めた頭頸部癌細胞株と同じ癌種の生検・手術組織材料を用いて免疫染色によりCD74発現を検討し、病期や治療効果、予後、EBVやHPVとの関連を統計学的に明らかにする。また、患者と健常人血清のMIF値を測定・比較するとともに、血清MIF値と組織内CD74発現量や治療効果・予後との関連を統計学的に明らかにする。治療標的としてのCD74の評価や腫瘍細胞におけるCD74の機能解析も上記と平行して進める。CD74陽性細胞株培養系にマウス抗ヒトCD74抗体と補体を加え、補体依存性細胞傷害活性を測定する。同様の細胞と抗体を使用し、抗体依存性細胞傷害活性をADCCレポーターバイオアッセイで測定する。また、CD74陽性細胞株でsiRNAなどによるCD74のノックダウンを行い、細胞株の細胞増殖や遊走・浸潤能の変化を解析するとともに、遺伝子発現をアレイ解析で網羅的に比較し、CD74発現と連動する遺伝子やCD74を介したシグナル伝達経路を解明する。細胞株に対してMIFの添加、CD74やMIFの中和抗体の添加、4-IPPやISO-1といったMIF阻害薬の添加なども行い、増殖・浸潤能の変化を調べる。さらに、補体やNK細胞活性が保存されているヌードマウスもしくはSCIDマウスにヒトCD74陽性頭頸部癌細胞株を皮下移植してxenograftモデルを作製し、マウス抗ヒトCD74抗体やMIF阻害薬を投与して抗腫瘍効果を明らかにする。