2021 Fiscal Year Research-status Report
シングルセル解析による内リンパ嚢の発生メカニズムの解明
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21K09602
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
本田 圭司 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 助教 (90621079)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 前庭水管拡大 / 先天性難聴 / シングルセル |
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| Outline of Annual Research Achievements |
前庭水管拡大症は先天性難聴で最も頻度の高い内耳奇形である。前庭水管拡大症の多く は常染色体劣性遺伝の形式をとり、難聴と甲状腺腫を特徴とするペンドレッド症候群、または甲状腺腫を伴わない非症候性難聴DFNB4に伴って発症する。その原因遺伝子は、細胞膜で陰イオントランスポーターとして機能するペンドリン/SLC26A4 である。
ペンドリンは内耳では蝸牛の外ラセン溝細胞、前庭の移行細胞、および内リンパ嚢のイ オノサイトである mitochondria-rich cell (MRC)に発現する。近年の研究から、胎生期の内 リンパ囊において内リンパ吸収を担っている MRC の機能不全が、この疾患の病態に強く 関与することがわかってきた。
本研究の目的は、シングルセル遺伝子解析を用いて、マウス内リンパ囊の MRCがどのような機構で分化するのかを明らかにすることにある。本研究で得られた成果から、生体内での前駆細胞から MRC への分化誘導や、ES/iPS 細胞から分化した細胞の移植といった 戦略により、前庭水管拡大症の治療法の確立につながることが期待できる。
まず、内リンパ嚢の単一細胞懸濁液を効率的に収集する処理方法を検討した。当初計画していたcollagenase+Dispaseの混合液ではなく、LiberaseTM+Dnaseで37℃、30分振盪するプロトコルがもっとも生細胞を効率よく収集できることが判明した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
初年度中に、細胞調整プロトコルの最適化を完了したが、検証に時間を要しシングルセルライブラリの作成までに至らなかった。
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| Strategy for Future Research Activity |
研究計画の大きな変更はなく、次年度でライブラリ作成およびシーケンスを行い、解析を行う予定である。
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| Causes of Carryover |
cDNAライブラリ作成以降が次年度に持ち越しとなったため、次年度使用額が生じた。次年度に計画通りcDNAライブラリ作成およびシーケンスを行う予定である。
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