2021 Fiscal Year Research-status Report
Functional analysis on the EWSR1-ATF1 fusion gene in salivary gland carcinogenesis
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21K09612
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
折舘 伸彦 横浜市立大学, 医学研究科, 教授 (90312355)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
蓮見 壽史 横浜市立大学, 医学部, 助教 (40749876)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 唾液腺癌 / EWSR1-ATF1融合遺伝子 / 硝子化明細胞癌 / 条件特異的遺伝子改変マウス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
頭頸部領域においては、唾液腺癌で複数の融合遺伝子が報告されている。唾液腺癌は頭頸部癌のうち3-5%を占め、多彩な組織型を示すが、それぞれの組織型の症例数は限られているため、発癌過程における融合遺伝子の機能に関する研究は進んでいない。唾液腺に生じる硝子化明細胞癌では、12番染色体と22番染色体の転座による融合遺伝子EWSR1-ATF1が93%の症例にみられるとの報告があるため、融合遺伝子産物が異常な転写活性を有し発癌を誘発することが想定される。本研究課題では対象とするEWSR1-ATF1をTet-on systemを用いて全身に発現させたモデルマウスでは軟部組織に腫瘍形成が認められたYamadaらの先行研究報告があるが、 3ヶ月の観察期間では唾液腺を含め、他部位には明らかな腫瘍形成は見られなかった。唾液腺における硝子化明細胞癌の発生に関する EWSR1-ATF1の役割を解明するには唾液腺特異的にEWSR1-ATF1を発現し、他部位では当該融合遺伝子を発現しない条件特異的遺伝子改変マウスを作製することが理想である。 Cre-loxpシステムによる条件特異性の賦与は、1）組織特異的プロモーターの下流にCreリコンビナーゼ遺伝子をつけた外来遺伝子(MMTV-Cre、lama-Cre)、2）高発現が期待できるプロモーター下流に2つのloxP配列に挟まれた転写停止配列、さらにその下流に目的の遺伝子をつなげた外来遺伝子(EWSR1-ATF1)を導入することによる。このシステム下では、組織特異的プロモーターが働く部位ではCreの働きでloxP配列間の転写停止配列が欠損し、その下流に位置する目的遺伝子が高発現するが、組織特異的プロモーターが作動しない部位ではCreが働かないため転写停止配列が機能して目的の遺伝子は発現しない。このシステムを用いて唾液腺特異的遺伝子改変マウスの作製を試みている。一方で転写因子ATF1のみを唾液腺特異的に発現する唾液腺特異的ATF1発現マウスの作成については順調に進んでいる。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
転写因子ATF1のみを唾液腺特異的に発現する唾液腺特異的ATF1発現マウスの作成については順調に進んでいるものの、本研究課題の主眼であるWSR1-ATF1融合遺伝子の条件特異的遺伝子改変マウスの作製については、そのベクター作成に手間取っており、遺伝子改変マウスの作製にまで至っていない。
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| Strategy for Future Research Activity |
引き続き、上記のシステムを用いる唾液腺特異的遺伝子改変マウスの作製を試みる。一方で転写因子ATF1のみを唾液腺特異的に発現する唾液腺特異的ATF1発現マウスの作成については順調に進んでおり、凍結胚の確保等を進める。その上で、EWSR1-ATF1融合遺伝子発現マウスの完成した時点で、両者の比較を行う計画を持っている。
Tet-onシステムによる条件的EWSR1-ATF1融合遺伝子発現細胞の作成については、現時点では着手する段階にはないと考えている。
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| Causes of Carryover |
条件特異的遺伝子改変マウスを作製に必要な発現ベクターの作成に時間を要し、実際の遺伝子改変マウスに向けたマイクロインジェクションにまで至っておらず、使用額に変更が生じた。
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