2021 Fiscal Year Research-status Report
Development of novel cancer therapy targeting the interaction of the HSP40 family with mutant p53
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21K09855
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
戒田 篤志 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 助教 (40632097)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 頭頸部がん / p53変異 / Gain of function / HSP40ファミリー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
頭頸部癌をはじめとする多くの種類の癌では、p53に変異が生じていることが知られているが、変異p53は癌の発生に関与するのみならず、その蓄積が癌の進行を促進することが知られている。しかしながら、何故、細胞内で変異p53が安定化し、蓄積するかについては不明な点が多かった。私たちのグループでは、最近、変異p53の蓄積メカニズムとしてHSP40ファミリーのひとつであるDNAJA1が構造変異型p53と結合し、変異p53を安定化させることを見出し、その結果、癌の転移を促進することを明らかにした。しかし、HSP40ファミリーには50種類以上のアイソフォームが存在し、DNAJA1以外のHSP40が変異p53を安定化する可能性は未だ明らかになっていない。本研究課題では、変異p53を安定化するHSP40を明らかにし、変異p53との相互作用を阻害する化合物を同定することで、新規癌治療法の開発を目指す。
私たちは、HSP40スクリーニングシステムを構築するために、変異p53を蛍光標識することでその発現レベルを蛍光強度から可視化し得るベクターの作製を試みた。p53のアミノ酸175番目のArgをHisに変えた変異p53配列のN末端またはC末端にAcGFPを融合したプラスミドを作製し、p53ノックアウト細胞に導入した。いずれもp53を緑色シグナルとして検出でき、そのシグナル分布は、抗p53抗体での免疫染色結果と一致するものであった。更なるvalidationのために、siRNAにてDNAJA1をノックダウンすることでp53シグナルの減弱が観察されるかを評価したところ、C末にGFPを融合させたベクターでは緑色強度の減弱が認められたが、N末に融合させたベクターでは顕著なシグナルの低下は認められなかった。そこで、今後の実験では、変異p53のC末端にGFPを融合させたベクターを用いて検討を進めていく予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究課題において、スクリーニングシステムの構築が重要な第一段階であったが、まずは予定通り、変異p53の可視化システムが作製できたことから、当該年度はおおむね順調と判断した。
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| Strategy for Future Research Activity |
変異p53(R175H)に加え、他のミスセンス変異体との融合ベクターも構築し、p53の変異の違いにおけるHSP40の役割についても検討していきたいと考えている。今後は、構築したスクリーニングシステムを応用し、HSP40ファミリーを標的としたsiRNAライブラリーを用い、変異p53の安定化に寄与し得るHSP40を同定していく予定である。
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