2024 Fiscal Year Research-status Report
医療従事者に感染リスクの高い疥癬の迅速診断法の開発-ベッドサイド診断への応用-
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21K11132
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| Research Institution | Osaka Institute of Public Health |
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Principal Investigator |
青山 幾子 地方独立行政法人 大阪健康安全基盤研究所, 微生物部, 主幹研究員 (90332452)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐々木 正大 大阪大学, 微生物病研究所, 助教 (20547533)
池森 亮 地方独立行政法人 大阪健康安全基盤研究所, 微生物部, 研究員 (90827255)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2026-03-31
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| Keywords | 疥癬 / POCT / 抗体 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
疥癬は、ヒゼンダニが皮膚の角質層に寄生することで発症する皮膚疾患であり、患者との接触を介して人から人へと感染が拡がる。特に、施設内の同室者や看護・介護を行う医療従事者では感染リスクが高く、重要な感染症の一つとされている。近年、国内では病院や高齢者施設、養護施設などにおける集団発生の報告が増加している。疥癬は原因となるヒゼンダニを駆除することで治癒可能な疾患であり、保険適用の治療薬も普及してきている。しかし、治療には正確な診断が不可欠である。現在の診断法は、皮疹部からの虫体や虫卵の直接検出に依存しているが、専門的な知識と経験が求められるため、見逃しのリスクが高い。こうした背景から、迅速かつ簡便に診断を行える臨床現場即時検査（Point-of-Care Testing：POCT）の開発が強く望まれている。
本研究では、ヒゼンダニ感染症に対するマウスモノクローナル抗体を作製し、診断精度の向上を目的とした疥癬鑑別用抗原検出迅速診断キットの開発および評価を行うことを目的とした。具体的には、疥癬患者由来の皮膚や鱗屑等の検体から単離したヒゼンダニ虫体および虫卵の乳剤を精製し、マウスに投与して免疫を誘導し、細胞融合技術を用いてハイブリドーマを作製した。さらに、動物関連施設から提供を受けた動物由来疥癬検体（イヌセンコウヒゼンダニ）についても、皮膚および毛から虫体・虫卵を単離し、同様に乳剤を精製してマウスに投与することで、ヒトヒゼンダニとの共通抗原を認識するハイブリドーマの作出を試みた。加えて、ヒゼンダニ抗原に対して特異的な組換えタンパク質の作製を行い、この組換え抗原を用いたハイブリドーマ作出にも取り組んでいる。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
本研究の遂行にあたっては以下の要因により遅延が生じた。
まず、新型コロナウイルス感染症（COVID-19）に対する検査業務への対応により、研究活動に割く時間が制限されたことに加え、所属機関の移転に伴い作業の一時中断を余儀なくされた。移転後は動物舎の稼働開始に時間を要し、動物実験の実施に制限が生じた。さらに、COVID-19流行以降、協力医療機関における疥癬患者の受診件数が著しく減少し、疥癬検体の入手が困難となった。その結果、免疫抗原や抗体スクリーニングに使用できる検体が不足し、当初予定していた抗体産生ハイブリドーマの一部作出を見合わせることとなった。これらの状況を踏まえ、協力医療機関の追加および動物関連施設との連携を図り、動物由来疥癬検体の収集を進めた。また、使用可能な抗原の確保策として、組換えタンパク質の作製と、それを用いた抗体作出手法の検討・導入を行った。
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| Strategy for Future Research Activity |
ヒゼンダニ抗原に対するモノクローナル抗体産生ハイブリドーマの作出を引き続き実施する。抗原としては、ヒト由来のヒゼンダニに加え、動物由来のセンコウヒゼンダニおよび作製済みの組換えタンパク質を組み合わせて用いることで、抗体の反応性および特異性の向上を図る。得られたモノクローナル抗体は、臨床現場での利用を見据えた抗原検出系の構築に活用し、迅速診断キットとしての実用化に向けた基盤整備を進めていく。現在のところ、キットに有用なモノクローナル抗体は得られていないが、今後組換えタンパク質抗原を追加して得られた抗体の反応性や特異性について詳細な評価を行い、より高精度な免疫誘導法の最適化を図ることで、診断用抗体の取得を目指す。
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| Causes of Carryover |
COVID-19の検査対応や、所属の移転対応、検体入手困難等により研究計画に遅延が生じ、計画していた実験が遅れたため、予算を執行できなかった。今年度は、組換えタンパク抗原を用いた免疫誘導法を主軸として検討を進め、効率的な抗体スクリーニングの実施および迅速診断系の基盤構築を推進することで遅延の解消を図るとともに、作製済みのハイブリドーマの解析を進める予定である。これらの活動に必要な試薬・消耗品等の購入に、当該年度の繰越し分を含む予算を適切に使用する計画である。
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