2021 Fiscal Year Research-status Report
筋の健常性維持システムにおけるレニン・アンジオテンシン系の役割と筋疾患治療応用
| Project/Area Number |
21K11624
|
|---|
| Research Institution | Ehime University |
|---|
Principal Investigator |
岩波 純 愛媛大学, 医学系研究科, 准教授 (90624792)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
金川 基 愛媛大学, 医学系研究科, 教授 (00448044)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
|
| Keywords | レニン・アンジオテンシン系 / 筋疾患 / 筋再生 / 筋萎縮 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
レニン・アンジオテンシン系の受容体の一つであるアンジオテンシンII2型（AT2）受容体は、骨格筋では発現していないと考えられてきたことから研究対象ではなかったが、筋衛星細胞に発現していることから、筋再生に影響していることが示唆された。
そこで我々は、筋再生へのAT2受容体の影響を検討するため、AT2受容体欠損（AT2KO）マウスにカルディオトキシン（CTX）を投与し、その後の筋線維の状態を検討した。10週齢の野生型（WT）およびAT2KOマウスの左前脛骨筋に30uM CTXを30uL、ふくらはぎに70uLを投与し、右足にはコントロールとして生理食塩水を投与した。5日後に前脛骨筋を採取し、蛍光免疫染色およびHE染色した。Embryonic myosinの陽性率で筋再生の指標とし、また筋線維の中心に核があるものを筋障害細胞として計測した。
CTX投与の5日後Embryonic myosin陽性率は、野生型（WT）では全体の80％だったのに対して、AT2KOでは55％程で低下していた。その陽性細胞の筋線維の大きさは、WT,AT2KOマウスで同程度であった。また、中心核の割合は、WT、AT2KOで変化は認められなかった。
次に筋萎縮におけるAT2受容体の影響を検討した。慢性腎障害では筋萎縮が認められることから、アデニン過剰投与による腎障害モデルでの検討を行ったところ、通常食で飼育したWT、AT2KOマウスでの筋線維では面積に変化は認められなかった。アデニンを投与することで両マウスとも筋断面積の減少が認められ、この萎縮はAT2KOマウスでWTマウスに比べて減弱する傾向あった。この結果から、筋萎縮に関して、AT2受容体は促進する可能性が示唆された。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
筋疾患モデルの作成、検討方法は金川教授の助言・指導により確立しており、AT2受容体欠損マウスは既に繁殖・飼育しているのでスムーズに研究を進められている。
CTX投与による筋障害モデルで5日後を中心として検討しているが、投与後3、7、14日でのサンプル採取を行っており、サンプルが十分にそろい次第検討できる状況である。
筋萎縮モデルに関して、腎障害のためのアデニン投与を検討したところ、慢性腎障害では長期間の投与が必要であるが報告にあった0.25％投与では、障害が強すぎ、死亡してしまうマウスもいたため、濃度を0.2、1.5％に落として投与して適切な濃度の検討を行った。0.15％では腎障害が弱く、0.2％では腎障害を認め、筋線維の変化も認められたことから、今後は0.2％を使用して検討を進める。また、現在、腎臓障害に関しては、附属病院の腎障害を専門としている先生にアドバイスをもらいスコア化することを進めている。
高齢マウスの準備には時間がかかるが、現在飼育しているマウスから半年、1年齢のマウスのサンプルを採取している。今後サンプル数の増加が必要であるが、マウスの数も十分なので高齢マウスのために用意している。
筋衛星細胞の単離方法は教わっており、現在WTの衛星細胞の染色などを行っている。
|
| Strategy for Future Research Activity |
AT2KOを用いた筋障害モデル、筋萎縮モデル、高齢マウスでの筋線維の大きさを検討することで、AT2受容体の影響を検討していく。また、これらのモデルマウスにAT2受容体刺激薬を投与することによる影響を検討することで、改善効果があるのか明らかにする。また、これらのマウスから採取した筋組織でのシグナル伝達をウェスタンブロットで検討することで詳細なメカニズムを明らかにする。
AT2KOマウスからの衛星細胞を単離して増殖能・分化能・細胞死を検討する予定である。現在WTマウスからの衛星細胞の単離、培養法を習得し、染色している。今後はAT2KOマウスからの衛星細胞を単離して検討を進めていく予定である。
|
| Causes of Carryover |
学会などのための旅費での使用がなかったため、消耗品・試薬での使用をしたが、繰越金がでた。繰越金となったものは、今後増えてくるマウスの飼育費として使用する予定である。また、旅費などに使用する予定である。
|
