2022 Fiscal Year Annual Research Report
高浸透圧誘導性ユビキチンリガーゼRNF183が関連するオートファジー経路の解明
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21K15271
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
岡元 拓海 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(薬学系), 特別研究員 (40826351)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | ユビキチンリガーゼ / RNF183 / 高浸透圧ストレス / NKCC1 / ビオチンリガーゼ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
RNF183を過剰発現させたHEK293細胞においてRNF183の基質タンパク質として同定したNKCC1について、他の細胞においても検証を行った。大腸由来細胞であるCaCo2細胞と内在性Rnf183の発現が確認できているマウス腎髄質集合管由来細胞であるmIMCD細胞において検証したところ、HEK293細胞と同様にRNF183によってNKCC1のリソソーム分解が促進されることが分かった。また、RNF183を過剰発現させたHEK293細胞においてオートファジーに関連する分子ATG5、Beclin1それぞれをノックアウトした際のRNF183によるNKCC1の分解抑制について検証したが、抑制は認められなかった。これより、RNF183によって内在化したNKCC1がオートファジーのマーカーであるp62と一致していたのは、オートファジーとは違う機構、もしくはATG5やBeclin1非依存的な新たな分解機構であることが示唆された。組織レベルでのRNF183の基質タンパク質同定を目指したビオチンリガーゼBioID2をRNF183遺伝子にノックインしたBioID2ノックインマウスの作製は完了し、今後解析を進めていく。また、培養細胞においても発現特異性を示すユビキチンリガーゼの解析のために、ポリユビキチン鎖に高い親和性を持つTUBEを発現させた細胞を構築した。
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Research Products
(8 results)
