2022 Fiscal Year Annual Research Report
HSV感染におけるTLR3リガンドの探索およびヌクレアーゼによる応答制御機構解明
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21K15464
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
佐藤 亮太 東京大学, 医科学研究所, 助教 (90779703)
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2021-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | TLR / RNase / マクロファージ / 肝臓 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ヘルペス脳炎の患者に二重鎖RNA(dsRNA)センサーTLR3のシグナル欠損が見つかっており、我々の結果からもTLR3-TypeI IFN産生シグナルがHSV感染防御に重要な役割を果たすと考えられる。ウイルス感染におけるTLR3応答制御の解明を行うために、本研究では、「HSV感染におけるTLR3リガンド探索」と「RNaseによるTLR3リガンドの制御機構の解明」の2つの点に着目して研究を進めた。
非感染、感染細胞からtotal RNAを抽出後、dsRNA精製キットを用いてdsRNAを精製したところ、感染後にdsRNAの量が増加していた。次世代シーケンスによる解析では、HSVおよび宿主細胞の配列どちらも確認できていることから、ウイルス、宿主細胞ともにリガンドとなる可能性があることが示唆された。
マクロファージで発現しているRNaseT2(RT2)を欠損した細胞株を作製した。RT2 欠損細胞では、TLR3応答が上昇、TLR7応答は減弱した。RT2欠損細胞に 野生型を強制発現した細胞では、上昇していたTLR3応答が減弱し、減弱していたTLR7応答が上昇した。酵素活性がTLR応答に重要かどうか検証するために、RNase活性部位アラニン置換変異体を作製した。野生型では、TLR3リガンドであるdsRNAおよびTLR7リガンドであるssRNAが分解されたのに対し、変異体では分解が見られなかった。RT2欠損細胞に活性部位変異体を強制発現した細胞では、TLR応答が変化なかったことから、RNase活性がTLR応答に重要だということが示された。共焦点顕微鏡によりRT2の局在を観察したところ、TLR3や7と同様、エンドリソソームに局在していることがわかった。これらのことから、RT2はエンドリソソームに到達したdsRNAやssRNAを分解することによりTLR3応答やTLR7応答を制御することが示された。
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[Journal Article] STING signalling is terminated through ESCRT-dependent microautophagy of vesicles originating from recycling endosomes2023
Author(s)
Kuchitsu Y, Mukai K, Uematsu R, Takaada Y, Shinojima A, Shindo R, Shoji T, Hamano S, Ogawa E, Sato R, Miyake K, Kato A, Kawaguchi Y, Nishitani-Isa M, Izawa K, Nishikomori R, Yasumi T, Suzuki T, Dohmae N, Uemura T, Barber GN, Arai H, Waguri S, Taguchi T.
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Journal Title
Nature Cell Biology
Volume: 25
Pages: 453～466
DOI
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[Journal Article] Role of the Orphan Transporter SLC35E1 in the Nuclear Egress of Herpes Simplex Virus 12022
Author(s)
Maeda F, Kato A, Takeshima K, Shibazaki M, Sato R, Shibata T, Miyake K, Kozuka-Hata H, Oyama M, Shimizu E, Imoto S, Miyano S, Adachi S, Natsume T, Takeuchi K, Maruzuru Y, Koyanagi N, Jun A, Yasushi K.
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Journal Title
Journal of Virology
Volume: 96
Pages: 10
DOI
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