乳癌発癌機構におけるゲノム不安定性の53BP1を指標とした総合的解析

2023 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 21K15572
• Research Institution: Nagasaki University
• Principal Investigator: 上木 望 長崎大学, 病院(医学系), 助教 (80890201)
• Project Period (FY): 2021-04-01 – 2025-03-31
• Keywords: 乳癌 / 53BP1 / 乳腺 / 外科手術 / ゲノム不安定性

Outline of Annual Research Achievements

①乳癌の悪性度や治療戦略の指標となる内因性DNA鎖切断や他のGIN指標となるDDR異常をin situで同定し定量可能か？
②乳癌周囲乳腺組織に“前癌状態”としての特異的分子異常が存在し、分子病理学的観点から客観的に評価可能か？
上記2点の問いに答えるため、現在までに悪性症例37例（浸潤性乳管癌31例、粘液癌2例、小葉癌2例、非浸潤性乳管癌2例）の腫瘍径、リンパ節転移の有無、脈管侵襲の有無、ER発現率、PgR発現率、HER2発現率、Ki-67発現率、p53発現率、Histological grade、年齢、閉経の有無、妊娠出産回数、授乳歴、家族歴、既往歴、再発の有無に関するデータの収集、および良性症例19例（乳腺線維腫12例、乳管内乳頭腫7例）の腫瘍径、年齢、閉経の有無、妊娠出産回数、授乳歴、家族歴、既往歴、再発の有無に関するデータの収集が完了し、53BP1とKi67の蛍光二重免疫染色による蛍光顕微鏡を用いた観察も終了している。解析を行っていないため定かではないが、乳癌手術症例、非乳癌手術症例の正常背景乳腺のいずれも小葉近傍の乳管において53BP1の過剰発現を認めている。小葉から離れた大きな乳管では53BP1の発現が低下しており小葉近傍の乳管では何らかのゲノム不安定性が起こっている可能性が示唆される。また、興味深いことに乳癌の腫瘍部においては53BP1発現低下が見られる症例が多かった。食道の53BP1解析(Ueki et al, Pathol Res Pract 2019)にて浸潤癌先進部では53BP1発現が有意に低下しておりゲノム不安定性のさらなる増加に伴ってDNA損傷応答の機能自体が低下していることが示唆された。乳癌の研究においても同様のことが起こっているかもしれない。今後は統計学者の協力を仰ぎながら解析、およびさらなる症例の追加検討を行っていく。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

Pilot studyでは保存病理乳腺針生検FFPEを用い53BP1とKi-67蛍光二重染色を行った。しかし、生検検体は微小であり十分な組織量、背景組織を確保できなかった。そのため保存病理乳腺手術検体FFPEにおいて53BP1とKi-67蛍光二重染色を行うこととした。当初予定し、症例をすでに集積していた保存病理乳腺針生検FFPEではなく、保存病理乳腺手術検体FFPE検体の収集を新たに開始したため研究が遅れてしまった。現在、乳腺手術症例悪性例37例、乳腺手術症例良性例19例にて53BP1とKi-67の蛍光二重染色は完了している。

Strategy for Future Research Activity

現在、乳腺手術症例悪性例37例、乳腺手術症例良性例19例にて53BP1とKi-67の蛍光二重染色、および観察、臨床的データの収集は完了している。この1年でこれらの解析、および足りない症例の補足や追加実験を行う。

Causes of Carryover

当初は悪性症例50例、良性症例30例を目標に、悪性症例50例の53BP1とKi-67蛍光二重染色を予定していたが、実際は悪性症例37例、良性症例19例の蛍光二重染色が完了しているのみである。当初見積もった症例数に達せず、試薬の購入額が当初見積もった額よりも低額であったため次年度使用額が生じてしまった。今後は症例数を増やし、さらに53BP1とKi-67蛍光二重染色を行うための試薬、Anti-53BP1, Rabbit-Poly, A300-272A, BET(100マイクロl)、Goat anti-Rabbit IgG (H+L) HighlyCross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor Plus 488(1㎎)、Antibody Diluent、DAPI、Protein Block等の購入に使用する計画である。